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一种茶碱人工抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1) 制备人工半抗原：(a) 将5,6‑二氨基‑1,3‑二甲基脲嘧啶和戊二酸酐以摩尔比为1︰2加入圆底烧瓶中，室温下搅拌反应17小时；反应结束后反应液用油泵转干得到黄色固体产物；薄层层析检测：层析液体积比：无水乙醇︰浓氨水︰CHCL2︰1,4二氧六环=8︰1︰10︰1，产物Rf =0.2；(b) 向上一步产物中加入2N 的NaOH溶液75℃回流反应1.5 小时，经热水重结晶得到固体产物，即茶碱半抗原；薄层层析检测：层析液体积比：无水乙醇︰浓氨水︰CHCL2︰1,4二氧六环=8︰1︰10︰1，产物Rf =03； (2) 制备茶碱人工抗原：(c) 将茶碱半抗原与N‑羟基琥珀酰亚胺、环己基碳酰二亚胺以摩尔比为1︰1.5︰1.5溶于N,N‑二甲基甲酰胺中，室温搅拌反应18小时，反应结束后离心取上清液记为A液；(d) 将氯化钠与十二水磷酸氢二钠、二水磷酸二氢钠以摩尔比为78.3︰4.2︰1溶于双蒸水中，制备钠离子浓度为0.1mol/L的PBS缓冲液，pH为7.4；(e) 将牛血清蛋白溶于PBS缓冲液中，得到浓度为5mg/ml的B液；(f) 将A液缓慢滴加到B液，A液与B液的体积比为1︰5，得到的混合液在4℃条件下静置保存过夜，得到人工抗原混合液；(g) 将人工抗原混合液于PBS缓冲液中透析，透析结束后离心取上清液即得到人工抗原：茶碱‑牛血清蛋白。 |
