b型流感嗜血杆菌多糖结合疫苗活化方法

摘要

本发明公开了b型流感嗜血杆菌多糖结合疫苗活化方法，它包括以下步骤：A、制备Hib多糖；B、将CDAP用乙腈溶解成溶液；C、将Hib多糖配制成溶液；D、向Hib多糖溶液中加入CDAP溶液，室温搅拌2～5分钟；E、将ADH用NaHCO3溶解成溶液，将其加入混合溶液中，室温搅拌0.5～2小时；F、将反应结束后的溶液上样于预先用注射用水平衡好的SephadexG-25 凝胶层析柱，收集外水体积的洗脱液，冻干即为多糖-ADH衍生物。本发明的有益效果是：制备的Hib-ADH衍生物的质量指标可达到行业标准，且采用安全无毒的CDAP替代对人和环境危害极大的溴化氰作为活化剂，提高了安全性，避免了对人和环境的危害。

主权项

b型流感嗜血杆菌多糖结合疫苗活化方法，其特征在于：它包括以下步骤：A、制备Hib多糖，其包括以下子步骤：A 1、将杀菌后的培养液采用8000～1200rpm离心20～40min沉淀菌体，收集上清液；A 2、将CTAB加入上清液中，CTAB与上清液的重量体积比（w/ v）为1:800～1:1200，室温搅拌0.5～1.5h，得到的混合液8000～1200rpm离心20～40min后收集CTAB与Hib荚膜多糖的复合物沉淀；A3、复合物沉淀用0.5～1.5M 氯化钠溶液溶解，室温搅拌1～3小时，使Hib荚膜多糖与CTAB解离；加入3～5℃预冷的无水乙醇至乙醇终浓度为20～30%（v/v），3～5℃搅拌过夜；A 4、8000～1200rpm离心20～40min，收集上清液，上清液中继续加入无水乙醇至乙醇终浓度为70～80%（v/v），3～5℃搅拌过夜，8000～1200rpm离心20～40min，收集沉淀；A 5、沉淀用8～12%饱和醋酸钠溶解，按体积比1:2～1:3加入冷酚，搅拌0.5～1.5小时后6000～8000rpm离心50～70min，收集上清液；A 6、上清液用0.05～0.15M氯化钠溶液透析去除残余苯酚，加入乙醇至终浓度70～80%，离心收集沉淀；A 7、沉淀用无水乙醇和丙酮各洗一～三次，干燥后用灭菌注射用水溶解，即得Hib多糖；B、将1‑氰基‑4‑二甲氨基吡啶四氟硼酸酯（CDAP）用乙腈溶解成溶液；C、将Hib多糖溶解于注射用水中，配制成溶液，调节pH至9.0；D、按Hib多糖溶液：CDAP溶液=2：1～3:1的体积比向Hib多糖溶液中加入CDAP溶液，室温搅拌2～5分钟；E、将ADH用NaHCO3溶解成溶液，将其按多糖溶液：ADH溶液=1：3～1：5的体积比加入混合溶液中，室温搅拌0.5～2小时；F、将反应结束后的溶液上样于预先用注射用水平衡好的Sephadex G‑25 凝胶层析柱，收集外水体积的洗脱液，冻干即为多糖‑ADH衍生物。