一种丙氧酚人工抗原的制备方法

摘要

本发明提供了一种丙氧酚人工抗原的制备方法，第一步为半抗原的制备及检测：以chirald为原料，通过与戊二酸酐的缩合反应，在氮位上引入羧基得到含羧基的半抗原；第二步为人工抗原的制备与检测：通过碳二亚胺法使之与牛血清蛋白(BSA)结合制备丙氧酚的人工抗原即丙氧酚-牛血清蛋白。所制备的丙氧酚人工抗原可进行动物免疫，取得相应的丙氧酚抗体，可用于各种丙氧酚类免疫分析法的研究，为丙氧酚的检测提供更加方便快速准确的途径。

主权项

一种丙氧酚人工抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1) 制备人工半抗原：(a) 将(2S,3R)‑(+)‑4‑二甲氨基‑1,2‑二苯基‑3‑甲基‑2‑丁醇和戊二酸酐以摩尔比为1：10加入圆底烧瓶中，100℃下搅拌反应72小时后，减压蒸干溶剂，残渣用氢氧钠水溶液逐步溶解，再用饱和氢氧化钠水溶液调pH=9，经乙酸乙酯洗涤后水相用盐酸溶液调pH=1，二氯甲烷萃取，合并有机相，经干燥，过滤，减压蒸馏得到棕褐色固体，薄层层析法纯化得到丙氧酚半抗原；薄层层析：层析液体积比：95%乙醇︰1,4‑二氧六环︰二氯甲烷︰氨水=8︰1︰10︰1；产物Rf =0.3；    (2) 制备丙氧酚人工抗原：(b） 将丙氧酚半抗原与N‑羟基琥珀酰亚胺、环己基碳酰二亚胺以摩尔比为1︰1.5︰1.5溶于N,N‑二甲基甲酰胺中，室温搅拌反应18小时，反应结束后离心取上清液记为A液；(c) 将氯化钠与十二水磷酸氢二钠、二水磷酸二氢钠以摩尔比为78.3︰4.2︰1溶于双蒸水中，制备钠离子浓度为0.1mol/L的PBS缓冲液，pH为7.4；(d) 将牛血清蛋白溶于PBS缓冲液中，得到浓度为10mg/ml的B液；(e) 将A液缓慢滴加到B液，A液与B液的体积比为1︰10，得到的混合液在4℃条件下静置保存过夜，得到人工抗原混合液；(f) 将人工抗原混合液于PBS缓冲液中透析，透析结束后离心取上清液即得到人工抗原：丙氧酚‑牛血清蛋白。