副猪嗜血杆菌菌体蛋白的提取及双向电泳方法

摘要

本发明公开一种副猪嗜血杆菌菌体总蛋白的提取及双向电泳方法，利用本发明的提取方法（包括菌体前处理、裂解、蛋白粗提、蛋白纯化等步骤）可获得副猪嗜血杆菌总蛋白，同时结合本发明的双向凝胶电泳分析方法（包括第一向等电聚焦电泳、平衡、第二向SDS-PAGE电泳等步骤）可以获得清晰，稳定的双向电泳图谱，便于深入开展副猪嗜血杆菌的蛋白质组学研究，从而为寻找差异蛋白质点和对蛋白质点的有效鉴定打下了坚实的基础为下一步高通量、大范围地揭示副猪嗜血杆菌细胞内某些蛋白的表达差异性对其生理功能产生的系统影响提供了前期必要条件。

主权项

一种副猪嗜血杆菌菌体蛋白的提取方法，其特征在于包括以下步骤：<1>菌体前处理将在TSA培养基中培养36小时的单菌落接种于TSB培养基中，37℃摇床培养36h；4℃，13000rpm/min，10min离心收集菌体，PBS洗涤三次，弃去上清；<2>菌体裂解往步骤<1>获得的菌体沉淀中加入适量裂解液，使沉淀菌体重新悬浮于裂解液中，冰浴超声5min后，4℃过夜裂解；<3>菌体蛋白粗提经步骤<2>从细菌中分离出的粗蛋白混合液，4℃，13000rpm/min离心，10min，取上清，6倍体积含0.07％DTT、10％TCA的丙酮溶液沉淀30min；4℃，13000rpm/min离心，20min，弃上清；沉淀物用含0.07％DTT的丙酮溶液重新悬浮10min，4℃，13000rpm/min离心，10min弃上清，重复2次；裂解液复溶，4℃，13000rpm/min离心，上清即为粗提的菌体蛋白。