大果红花油茶组织培养快速繁殖的育苗方法

摘要

本发明公开一种大果红花油茶组织培养快速繁殖的育苗方法，包括用来繁殖的外植体采集、无菌分化、壮苗培养和袋装苗移栽。选取芽尖或叶片作繁殖的外植体，经消毒，去除杂质，用分化培养基培养形成小植株，将诱导出的小植株切割后接入新的分化培养基中多次继代，获得的小植株接种到特制的壮苗培养基上培养，最后进行袋装苗移栽。本发明采用独创的培养基成分，培养基使用定向聚丙烯薄膜袋作为培养皿器。茶苗繁殖快；可以脱除多种植物病毒，使原来的优良种性得到保持；种苗品质好、移栽成活率高；开花挂果快；出油高、油质优；丰产期长。具有操作性强，应用价值高，具有独创性，为油茶种苗繁殖开辟了一条新的快速繁殖，投产快的途径。

主权项

一种大果红花油茶组织培养快速繁殖的育苗方法，其特征在于：采用大果红花油茶树芽苞作为外植体，消毒，配制分化培养基，壮苗培养基，用定向聚丙烯薄膜袋作为培养皿器，接种，培养，其技术工艺步骤如下，(1)采外植体，选定大果红花油茶树的嫩枝条剪下，连芽和叶片保湿保鲜采集，选取芽苞和嫩叶放清水冲洗，然后用饱和洗衣粉水清洗，再用流动的清水漂洗2～5分钟，(2)无菌分化，把漂洗干净的油茶树芽苞作为外植体，在无菌接种室工作台上用72％～75％的酒精消毒10～15秒后，用无菌水冲洗2～5次后置于0.1％～0.2％的升汞中消毒8～15分钟，再用无菌水漂洗4～6次，去掉外表杂物，把所消毒的芽苞放到150倍以上的电子显微镜下，用解剖刀切割外表的杂物，清理外表杂物后取下最顶的芽尖0.2～0.25mm组织，用接种针接种到分化培养基上培养15～20天得到小植株，所述的分化培养基每升含椰子汁50～150ml，蔗糖15～45g，卡拉胶6～10g，肌醇50～150mg，甘氨酸1～3mg，烟酸0.1～0.35mg，D‑泛酸钙0.1～0.54mg，吡哆辛盐酸0.2～3.5mg，生长素0.09～0.25mg，分裂素6BA0.1～0.3mg，羟烯腺嘌呤0.1～0.3mg，烯腺嘌呤0.01～0.03mg，其余为MS培养基中的1/2大量元素和微量元素成分，(3)快速增殖，培养15～20天后，将诱导出的小植株切割成0.3～0.5mm后接入新的分化培养基中，多次继代采用分化培养基，在每次转袋过程中，不断淘汰白化苗和污染袋苗，剪除枯黄叶片，经3～5次转袋培养后，得到的小植株再进行壮苗培养，(4)壮苗培养，将无菌分化增殖获得的小植株接种到壮苗培养基上培养60～80天得到小苗，所述的壮苗培养基每升含水解酪蛋白0.1～0.5g，蔗糖10～35g，卡拉胶6～10g，a‑萘乙酸0.2～5.0mg，肌醇20～120mg，盐酸硫胺4.5～15mg，甘氨酸1.5～6.0mg，烟酸0.5～5.5mg，吲哚丁酸0.1～3mg，D‑泛酸钙1～6mg，吡哆辛盐酸0.4～1.5mg，生长素0.09～0.25mg，苹果汁10～15g，其余为MS培 养基中的1/2大量元素和1/2微量元素成分，在上述(2)～(4)各步骤中所用的培养基均为pH5.4～6.1，培养温度24～30℃，每天光照10小时，光照度1500～2000Lx，所述的小植株的高度为1～2cm，所述的小苗为苗高4～6cm，每株苗有3～5条根。