三倍体铁皮石斛的培育方法

摘要

本发明涉及一种三倍体铁皮石斛的培育方法，该方法包括：①首先对铁皮石斛种质资源进行广泛收集，从中选出优良铁皮石斛；②对选出的优良铁皮石斛进行人工诱变，获得同源四倍体铁皮石斛；③以四倍体铁皮石斛为母本与二倍体铁皮石斛为父本进行有性杂交，获得三倍体铁皮石斛种子；④对三倍体铁皮石斛种子进行非共生萌发培养；⑤对三倍体铁皮石斛种子原球茎(PLBs)进行诱导与分化培养；⑥三倍体铁皮石斛成苗分化；⑦三倍体铁皮石斛瓶苗移栽；⑧三倍体铁皮石斛成苗栽培管理。本发明通过基因组三倍化，可以获得具有多倍体和杂交种双重优势的三倍体，其优势表现出具有巨大性和不可替代性，可以大幅度提高铁皮石斛药材产量，同时，三倍体铁皮石斛是永久杂种，可以固定杂种优势。

主权项

一种三倍体铁皮石斛的培育方法，其特征在于包括以下步骤：1)二倍体铁皮石斛按常规方法进行栽培管理，在开花后的5‑10天内进行同株异花授粉，授粉后的铁皮石斛植株，放在通风、半透光条件下，保持30‑50％湿度、25℃温度；2)在人工授粉后180天，剪下铁皮石斛蒴果，在超净工作台内用75％酒精消毒1分钟，再用0.1％升汞水溶液消毒10分钟，无菌水冲洗5遍，用无菌手术刀沿蒴果纵轴方向切开，将淡黄色铁皮石斛种子接种在1/2MS液体培养基中，60转/分，振动非共生萌发培养30天，至种子类原球茎(PLBs)发育成球形；3)进行四倍体铁皮石斛人工诱导，将发育成球形的种子类原球茎转入含有0.01％秋水仙碱的1/2MS液体培养基中，诱变处理130小时，4)将诱变处理后的铁皮石斛类原球茎转入1/2MS固体培养基上继续培养，直至铁皮石斛成苗形成，至成苗分化；取幼苗的根尖，先进行染色体前处理，然后进行染色体倍性鉴定，选取染色体数目2n＝76的幼苗，是加倍成功的同源四倍体铁皮石斛；5)四倍体铁皮石斛的栽培管理，将加倍成功的铁皮石斛幼苗进行移栽，按常规的铁皮石斛进行栽培管理，直至开花；6)当四倍体铁皮石斛开花后，以四倍体铁皮石斛为母本，二倍体铁皮石斛为父本，进行有性杂交，所结的铁皮石斛种子全部为三倍体铁皮石斛，即：4x♀×2x♂→3x；三倍体铁皮石斛与二倍体铁皮石斛相比，主要形态形状基本相同，但三倍体铁皮石斛的茎、叶、花表现出明显的增大，药材产量与石斛多糖含量显著提高；三倍体具有多倍体和杂交种双重优势，其杂交一代是“永久F1”，即永久杂种，固定了杂种优势；7)对三倍体铁皮石斛种子进行非共生萌发培养、类原球茎诱导、成苗分化，成苗移栽，按常规铁皮石斛进行栽培管理。