草莓的根尖脱毒与快繁技术

摘要

本发明提供了草莓脱毒与组培的方法，其包括对草莓进行预处理，获得消毒的根尖；在根尖诱导培养基上将根尖诱导培养成再生植株幼芽；在增殖培养基上将幼芽增殖培养成小苗；在继代生长培养基上使得小苗长成继代小苗；在生根培养基上使得继代小苗长成试管苗；并任选检测试管苗是否侵染病毒。另外，本发明还提供了多重RT-PCR同步快速检测草莓病毒的方法，其中采用了混合引物对。

主权项

草莓脱毒与组培的方法，其包括1）将草莓放入灭菌细沙内于34‑40℃下进行热处理，直至抽生根系；取1‑2cm长的主根根尖，消毒并水洗，此后，直接将前端0.1‑0.2mm根尖切下作为外植体；2）将外植体接种在根尖诱导培养基上，在22‑28℃，光强800‑1200lux、光照14‑18小时∕天下培养，四周后光强增强到1500‑2500 lux，六周后增强到3500‑4500 lux，培养直至从根尖诱导出再生植株幼芽，其中，根尖诱导培养基的配方为：MS基本培养基+ NH4NO3 400mg/L + KNO3 500mg/L+KH2PO4 50mg/L+6‑BA 0.3‑0.5mg/L+2,4‑D 0.1‑0.3mg/L+水解乳蛋白 1g/L+蔗糖 20 g/L；3）将再生植株幼芽接种在增殖培养基上，在22‑28℃，光强2000‑3000lux、光照14‑18小时∕天下培养，直至长成8‑10cm长的小苗，其中，增殖培养基的配方为：MS基本培养基+ NH4NO3 400mg/L + KNO3 500 mg/L + KH2PO4 50 mg/L +6‑BA 0.2‑0.5 mg/L+ NAA 0.1‑0.3mg/L+水解乳蛋白 1 g/L+蔗糖 20 g/L；4）将小苗剪成1‑3cm长的小段，接种在继代生长培养基上，在22‑28℃，光强2000‑3000lux、光照14‑18小时∕天下培养，直至长成8‑10cm长的继代小苗，其中，继代生长培养基的配方为：MS基本培养基+ NH4NO3 400mg/L + KNO3 500mg/L+KH2PO4 50mg/0.5L+6‑BA 0.1‑0.3mg/L +水解乳蛋白1 g/L+蔗糖 20 g/L； 5）将继代小苗接种到生根培养基上，在22‑28℃，光强2000‑3000lux、光照14‑18小时∕天下培养，直至长出根系，使得继代小苗长成试管苗，其中，生根培养基的配方为：MS基本培养基+NH4NO3 400mg/L+ KNO3 500 mg/L + KH2PO4 50 mg/L + NAA 0.1‑0.5mg/L+水解乳蛋白 1 g/L+蔗糖 20 g/L；和6）任选检测试管苗是否侵染病毒。