一种血清多肽及以其作为定量参比物的质谱半定量方法

摘要

本发明提供了一种血清多肽及以其作为定量参比物的质谱半定量方法，该血清多肽的质核比为m/z4466-4469。本发明提供的质谱半定量技术方法包括如下步骤：血清经过免疫学方法处理后，运用高通量的基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)进行检测，在所得质谱图中，计算得出标志物峰相对于参比物峰的相对强度，并将其作为反映血清中标志物含量的指标，由此建立完整的质谱半定量技术方法。

主权项

以质核比为m/z4466‑4469的血清多肽作为定量参比物的质谱半定量方法，其特征在于，包括以下步骤：1）血清经过免疫学方法处理：取15‑25μL固相载体置于Eppendorf管中，加入1.5μg‑24μg多肽抗体，4℃混合5分钟‑4小时，放置1‑5min，移出上清液，用0.01M pH7.4的PBS缓冲液清洗所得固相载体沉淀2‑5次，每次PBS缓冲液用量为100‑200μL；将10‑40μL血清样品和10‑50μL上述PBS缓冲液与清洗后的所述固相载体混合，4℃旋转混合8‑24h；放置1‑5min，移出上清液，用上述PBS缓冲液清洗沉淀2‑5次，每次PBS缓冲液用量为100‑200μL；加入10‑15μL5%乙酸洗脱液，吸排混合1‑5min；离心，收集的上清液中含有质核比为m/z4466‑4469的血清多肽；其中，所述固相载体为包被蛋白G或蛋白A的琼脂糖颗粒；所述多肽抗体为抗多肽5抗体或抗多肽6抗体，其中多肽5和多肽6的氨基酸序列分别为：NLGHGHKHERDQGHGHQ、NLGHGHKHDRDHGHGHQ；2）采用高通量的基质辅助激光解析电离飞行时间质谱对步骤1）处理后的上清液进行检测，检测次数为n，其中，n为≥1的整数；3）根据n次质谱检测结果得到的待定量标志物峰高Xm的算术平均数除以参比物峰高Xr的算术平均数，即得计算标志物的相对含量。