一种铁离子固定化亲和色谱整体柱的制备方法

摘要

本发明涉及一种固定化亲和色谱整体柱的制备方法，首先在毛细管中以N-丙烯酰氧基琥珀酰亚胺为功能单体，乙叉二甲基丙烯酸乙酯为交联剂，环己醇、十二醇和N，N-二甲基甲酰胺的混合物为致孔剂，偶氮二异丁腈为引发剂聚合而得的多孔整体柱基质；整体柱基质继而通过表面修饰反应，使其表面键合上含羧基的功能团，以用于后续的铁离子固定；最后通入含铁离子的溶液，实现铁离子的固定化，完成铁离子固定化亲和色谱整体柱的制备。本发明的优点为：制备方法简便，所得基质材料微观结构均一。与其他金属离子固定化亲和色谱整体柱制备方法相比，本方法所得铁离子固定化亲和色谱整体柱制备重现性好，整体柱性能稳定，对磷酸化肽段有很好的特异性富集能力。

主权项

一种铁离子固定化亲和色谱整体柱的制备方法，其特征在于：首先在毛细管中以N‑丙烯酰氧基琥珀酰亚胺为功能单体，乙叉二甲基丙烯酸乙酯为交联剂，环己醇、十二醇和N，N‑二甲基甲酰胺的混合物为致孔剂，偶氮二异丁腈为引发剂聚合而得多孔整体柱基质；整体柱基质继而通过表面修饰反应，使其表面键合上含羧基的功能团，以用于后续的铁离子固定；最后通入含铁离子的溶液，实现铁离子的固定化，完成铁离子固定化亲和色谱整体柱的制备；其中，基质聚合反应过程为：配制基质反应溶液，其中功能单体、交联剂和致孔剂三者之间的质量比例范围为2∶3∶5‑2.2∶2.9∶4.9，致孔剂中环己醇、十二醇和N，N‑二甲基甲酰胺三者之间的质量比例范围为76∶9∶15‑72∶8∶20，最后再添加引发剂，引发剂的用量为功能单体、交联剂和致孔剂三者总质量的0.5‑1.0％；以上各组分在室温下混合均匀后通氮气以除去溶解其中的氧气；将该反应溶液通入处理后的熔融石英毛细管中，并立即用硅橡胶封闭毛细管两端，置于52‑58℃水浴中反应14‑18h，完成基质聚合反应；所述表面修饰反应过程为：在填充了基质材料的毛细管中通入0.02‑0.2mol/L的N，N‑二羧基甲基‑L‑赖氨酸溶液，溶液的pH值为8‑10.0，在室温下反应0.5‑2h，进行基质表面的化学修饰。