一种从沙蜇刺丝囊毒素中分离具有清除超氧阴离子活性蛋白

摘要

本发明涉及生物技术，具体的说是一种从沙蜇刺丝囊毒素中分离纯化具有清除超氧阴离子活性蛋白。并将该蛋白命名为SmP90，其分子量为90kDa，N末端氨基酸序列为：Asn-Leu-Asp-Thr-Pro-Tyr-Cys-Phe-Tyr-Ser-Gly-Asp-Tyr-Gly-Gly，对超氧阴离子的半清除率约为16μg/mL。本发明具快速、简便的特点，为从沙蜇毒素分离蛋白SmP90及研究其生理功能提供了重要的方法指导。

主权项

一种从沙蜇刺丝囊毒素中分离具有清除超氧阴离子活性的蛋白，其特征在于：具有清除超氧阴离子活性的蛋白SmP90的提取方法：将处理后的沙蜇刺丝囊细胞上清液经微孔滤膜过滤，滤液经Superdex75凝胶色谱柱，采用含NaCl的PBS缓冲液以0.2～0.5mLmin‑1的流速进行纯化分离，收集洗脱体积处于130‑150mL的洗脱液，并且洗脱液在2～6℃下用3～5K的超滤管进行浓缩，所得浓缩液即为从沙蜇刺丝囊毒素中分离出的分子量为90kDa；N末端氨基酸序列为：Asn‑Leu‑Asp‑Thr‑Pro‑Tyr‑Cys‑Phe‑Tyr‑Ser‑Gly‑Asp‑Tyr‑Gly‑Gly的蛋白SmP90;所述处理后的沙蜇刺丝囊细胞上清液为：将沙蜇刺丝囊细胞加入预冷缓冲液中破碎，破碎后2～6℃离心，收集上清液，并将上清液在冰浴下加入硫酸铵至上清液饱和度为50%，而后放置过夜后离心收集沉淀，沉淀经含NaCl的PBS缓冲液溶解，并离心收集上清液，待用。