鹿猪牛羊马驴兔鸡的PCR鉴定用引物体系

摘要

本发明公开了一种鹿猪牛羊马驴兔鸡的PCR鉴定用引物体系及PCR鉴定方法，该引物体系可一次性检测多达八个动物物种，达到对常见动物物种基本覆盖的目的；且本发明引物均仅对各自物种目标片段进行特异性扩增，不会与其他物种起反应，因此也能适用于一次PCR反应中导入两种及以上引物对的多重PCR反应，从能有效缩短实验时间；此外在进行PCR时，使用优化的特定PCR反应体系及反应程序，采用统一PCR检测方法，简化了检测流程，建立了快速高效且特异性高的鉴定方式，从而有效的鉴定鹿血制品的真伪及掺假情况，为鹿血的质量控制提供了现代分子生物学的检测手段；此外该引物体系还能配合相关试剂制成试剂盒，方便使用，同时为工业化生产及应用提供了可能，其应用前景极好。

主权项

一种鹿猪牛羊马驴兔鸡的PCR鉴定用引物，其特征在于：由下列引物对组成：（1）对鹿12S rRNA基因进行扩增生成鹿特异性扩增片段的引物对Ⅰ：正向引物：5’‑GCCTTCCTATTGACCCTTAATAG‑3’反向引物：5’‑AGCGGCTGTAAAGTTACTTTCGT‑3’；（2）对猪12S rRNA基因进行扩增生成猪特异性扩增片段的引物对Ⅱ：正向引物：5’‑AGCACACCTATAACGGTAGCTCA‑3’反向引物：5’‑CCTAGCTATCGTGTGTCAGGATT‑3’；（3）对牛Cytb基因进行扩增生成牛特异性扩增片段的引物对Ⅲ：正向引物：5’‑CCCTCTTACTAATTCTAGCTCT‑3’反向引物：5’‑GTCCGATGGTGATATATGGGTG‑3’；（4）对羊Cytb基因进行扩增生成羊特异性扩增片段的引物对Ⅳ：正向引物：5’‑CGCCATGCTACTAATTCTTGTTCT‑3’反向引物：5’‑TGGAGGAAGGGTACAAGTACTAAG‑3’；（5）对马基因进行扩增生成马特异性扩增片段的引物对组合，该引物对组合由对马Cytb基因进行扩增生成马特异性扩增片段的引物对Ⅴ和对马12S rRNA基因进行扩增生成马特异性扩增片段的引物对Ⅵ组成：引物对Ⅴ：正向引物：5’‑CACAGCCCTGGTAGTCGTACA‑3’反向引物：5’‑TGTCCGCCGATTCATGTTAGT‑3’；引物对Ⅵ：正向引物：5’‑CGTGTCAAAGACTAATACCAA‑3’反向引物：5’‑AGCTATCGTGTAGTCAGAGGTA‑3’；（6）对驴16S rRNA基因进行扩增生成驴特异性扩增片段的引物对Ⅶ：正向引物：5’‑TTCAAGCTCAACGTCACACATA‑3’反向引物：5’‑TGTGTTGGGTTAACAATAGTCT‑3’；（7）对兔12S rRNA基因进行扩增生成兔特异性扩增片段的引物对Ⅷ：正向引物：5’‑GCGTAAAGCGTGATTAGAATAAAC‑3’反向引物：5’‑TAGCTATCGTGAGTTCGAAGAGT‑3’；（8）对鸡12S rRNA基因进行扩增生成鸡特异性扩增片段的引物对Ⅸ：正向引物：5’‑ATCCATCTTAGCCTCAACGATTAA‑3’反向引物：5’‑CTATTGAGCTCACTGTTGTTCTTT‑3’。