一种亲和吸附介质纯化菠萝蛋白酶的方法

摘要

本发明涉及一种亲和吸附介质纯化菠萝蛋白酶的方法，包括：(1)仿生配基7肽的筛选；(2)噬菌体及其所展示的7肽配基通过交联剂戊二醛，以氨基乙醇-HCL为猝灭剂制备出交联噬菌体7肽亲和吸附介质CAPOP；(3)交联噬菌体7肽亲和吸附介质，以TBS/NaCl为洗脱剂，采用离心沉淀的方式，离心纯化菠萝蛋白酶；(4)菠萝蛋白酶的酶活以及含量测定。本发明工艺简单，成本低廉，重复性好；所筛选的7肽配基能够特异性识别菠萝蛋白酶，以此作为亲和色谱配基能够体现高效性和专一性；分离方法操作简单，快速、高效、分离量大，纯化倍数和酶活性较高，具有良好的应用前景。

主权项

一种菠萝蛋白酶7肽配基的应用，其特征在于：具体步骤如下：（1）1ml数量级为1012‑1014、pH7.0的噬菌体TBS溶液混合到150μl23.4μM戊二醛溶液中混匀，同时加入150μl50%的PEG6000震荡过夜，其中，溶液中含有噬菌体7肽；次日加入8ml1M pH9.0的氨基乙醇‑HCL，再加890μl5M的NaCl溶液，室温震荡2h；完成后10000rpm离心沉淀，TBS溶液洗涤5次，去上清，沉淀于0.02%NaN3TBS溶液中重悬，4℃保存，得到交联噬菌体7肽亲和吸附介质；所述交联噬菌体7肽配基的氨基酸序列是：Ile‑Gln‑Ser‑Pro‑His‑Phe‑Phe；（2）将0.1g交联噬菌体7肽亲和吸附介质溶于0.02%、pH为6.97的NaN3TBS溶液中，加入15ml15.59mg/ml的菠萝蛋白酶溶液，25.80℃吸附3h，混合液12000rpm离心沉淀，用0.2%的TBST清洗15次，用pH5.0～9.0的TBS/NaCl洗脱被吸附的菠萝蛋白酶，所得酶分子经冷冻干燥后用SDS‑PAGE表征，纯化倍数达78.37倍。