果汁中耐热菌的酶标葡萄球菌A蛋白-酶联免疫吸附检测方法

摘要

一种果汁中耐热菌的酶标葡萄球菌A蛋白-酶联免疫吸附检测方法，由捕集样品中耐热菌、耐热菌的增菌培养、包被酶标板、封闭酶标板、加酶标抗体与底物反应、酶标仪测定组成。本发明与耐热菌的ELISA快速检测方法相比，检测时间由24小时缩短到19小时，提高了灵敏度，耐热菌＜1个/10g，减少了检测所需步骤，降低了检测成本，可用于检测果汁中的耐热菌。

主权项

一种果汁中耐热菌的酶标葡萄球菌A蛋白‑酶联免疫吸附检测方法，由捕集样品中耐热菌、耐热菌的增菌培养、包被酶标板、封闭酶标板、加酶标抗体与底物反应、酶标仪测定组成，其特征在于所说的加酶标抗体与底物反应步骤为：向酶标板孔内每孔加入质量浓度为0.3125～160μg/mL的耐热菌多克隆抗体与稀释至1000～8000倍的酶标葡萄球菌A蛋白按体积比1∶1混合的混合物200μL，置于恒温箱中37℃反应30～120分钟，取出，用吐温‑20的质量分数为0.05％的物质的量浓度为0.01mol/L pH值为7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗酶标板3次，每次2～3分钟，轻轻甩尽，在纱布上倒扣轻轻拍干，向酶标板孔内每孔加入100μL底物工作液，在恒温箱中37℃反应5～20分钟，加入50μL物质的量浓度为2mol/L的硫酸溶液，终止反应。