一种比色法即时检测半胱氨酸含量的方法

摘要

本发明涉及一种比色法即时检测半胱氨酸含量的方法，包括：制备显色剂并配制半胱氨酸标准溶液；向10mL的容量瓶依次加入经稀释浓度为1.0×10-6mol/L显色剂标准溶液1.0mL、0.01mol/L NaCl溶液1.0mL、0.01mol/L十二烷基磺酸钠溶液1.0mL、pH值为7.5的混合磷酸盐缓冲溶液1.0mL和待测样品1mL，定容，摇匀，试剂空白作参比，1cm比色皿，646nm波长处测定溶液的吸光度A，记录吸光度差值ΔA，计算得待测样品中半胱氨酸含量。本方法具有操作简单，响应速度快，选择性好，灵敏度高等优点，可快速，准确的用于合成样品和生物样品中半胱氨酸浓度的定量测定。

主权项

一种比色法即时检测半胱氨酸含量的方法，包括：（1）显色剂N‑甲基‑N‑羟乙基苯胺方酸菁染料的制备称取摩尔比为2:1的N‑甲基‑N‑羟乙基苯胺和方酸，混合后加入体积比为1:1的正丁醇和甲苯混合物，在120℃回流反应8h，减压蒸除有机溶剂，再经柱层析分离，得蓝色晶体；（2）显色剂标准溶液的配制将上述蓝色晶体溶于DMSO中，配制成浓度为1mmol·L‑1的N‑甲基‑N‑羟乙基苯胺方酸菁染料标准溶液，在4℃下避光保存；（3）半胱氨酸标准溶液的配制称取半胱氨酸0.0121g溶于去离子水，配制成浓度为1mmol·L‑1的半胱氨酸标准溶液，在4℃下保存；（4）待测样品中半胱氨酸浓度的测定向10mL的容量瓶加入显色剂标准溶液1.0mL，使其在10mL容量瓶中的最终稀释浓度为1.0×10‑6mol/L，然后依次加入0.01mol/L NaCl溶液1.0mL、0.01mol/L十二烷基磺酸钠溶液1.0mL、pH值为7.5的混合磷酸盐缓冲溶液1.0mL和待测样品1mL，最后加水定容至刻度线，摇匀，试剂空白作参比，1cm比色皿，646nm波长处测定溶液的吸光度A，吸光度差值ΔA=A0‑A，其中A0为标准溶液吸光度值，通过回归方程为ΔA=6.25×10‑2+4.50×10‑4c，其中c的单位为nmol·L‑1，计算得待测样品中半胱氨酸浓度。