犬瘟热病毒、肠炎细小病毒和阿留申病毒的三重PCR试剂盒

摘要

本发明公开了一种能同时检测水貂犬瘟热病毒、肠炎细小病毒和阿留申病毒的三重PCR试剂盒，其组成包括:DNA聚合酶，dNTPs，引物，PCR缓冲液，双蒸水；其特征在于：所述的引物由3对引物组成，其中，第1对引物的序列为5’-GATAAAGCATGTCATTATAGTCCTAA-3’和5’-CTTGAGCTTTCGACCTTC-3’，第2对引物的序列为5’-AACTGGGCGGAGCCTAAA-3’和5’-CAGAGCGAAGATAAGCAG-3’，第3对引物的序列为 5’-GAAACCACGGTGGAGACA-3’和5’-AAGAGTTGACCTGGAGGG-3’。采用本发明多重PCR试剂盒可在同一反应体系中同时检测出是否有水貂犬瘟热病毒、肠炎细小病毒和阿留申病毒的感染或多重感染，具有较高的特异性和敏感性，从而节省时间和试剂，可以为貂群的快速和早期诊断提供有效的工具。

主权项

检测水貂犬瘟热病毒、肠炎细小病毒和阿留申病毒的三重PCR试剂盒，包括DNA聚合酶，dNTPs，引物，PCR缓冲液，双蒸水；其中引物由CDV，MEV，ADV  3对引物组成，引物序列为：CDV 引物：CDV‑P1 5’‑GATAAAGCATGTCATTATAGTCCTAA‑3’CDV‑P2 5’‑CTTGAGCTTTCGACCTTC‑3’MEV 引物：MEV‑P1 5’‑AACTGGGCGGAGCCTAAA‑3’MEV‑P2 5’‑CAGAGCGAAGATAAGCAG‑3’ADV  引物：ADV‑P1 5’‑GAAACCACGGTGGAGACA‑3’ADV‑P2 5’‑AAGAGTTGACCTGGAGGG‑3’， CDV，MEV，ADV各自的扩增目标长度为335bp、555bp和451bp；其特征在于所述的CDV引物的阳性对照质粒制备方法为：以水貂犬瘟热病毒的cDNA为模板，以5’‑GATAAAGCATGTCATTATAGTCCTAA‑3’和5’‑CTTGAGCTTTCGACCTTC‑3’为引物进行PCR扩增，得到335bp的扩增产物，将扩增产物回收并纯化后克隆至pMD18‑T载体，得到CDV阳性对照质粒；所述的MEV引物的阳性对照质粒制备方法为：以水貂肠炎细小病毒的DNA为模板，以5’‑AACTGGGCGGAGCCTAAA‑3’和5’‑CAGAGCGAAGATAAGCAG‑3’为引物进行PCR扩增，得到555bp的扩增产物，将扩增产物回收并纯化后克隆至pMD18‑T载体，得到MEV阳性对照质粒；所述的ADV引物的阳性对照质粒制备方法为：以水貂阿留申病毒DNA为模板，以5’‑GAAACCACGGTGGAGACA‑3’和5’‑AAGAGTTGACCTGGAGGG‑3’为引物进行PCR扩增，得到451bp的扩增产物，将扩增产物回收并纯化后克隆至pMD18‑T载体，得到ADV阳性对照质粒。