一种在里氏木霉分泌表达外源蛋白的表达设备及其应用

摘要

本发明公开了一种用于在里氏木霉(Trichoderma reesei)细胞分泌表达外源蛋白的表达设备。该表达设备从5’至3’依次包括以下元件：(1)里氏木霉的外切葡聚糖纤维二糖水解酶II启动子；(2)分泌表达的信号肽；(3)多克隆位点序列；(4)里氏木霉的外切葡聚糖纤维二糖水解酶II终止子。将外源基因插入上述表达设备中，经T-DNA二元载体转化根瘤农杆菌，和里氏木霉接合，所得里氏木霉基因工程菌可高效分泌表达来源于动物、植物和真菌等的异源基因，从中获得外源蛋白的大量生产。该里氏木霉培养条件粗放，适合固体培养和液体深层发酵，在产酶条件下不会产生真菌毒素和抗生素，产生的胞外蛋白质易于分离纯化，成本低廉。

主权项

一种用于在里氏木霉（Trichoderma reesei）细胞内分泌表达外源蛋白的表达设备，其特征在于，所述的表达设备从5’至3’依次包括以下元件：（1）控制外源基因在里氏木霉中转录的里氏木霉外切葡聚糖纤维二糖水解酶II启动子（PcbhII）；（2）控制外源蛋白在里氏木霉中分泌表达的信号肽的编码序列；（3）多克隆位点序列；（4）控制外源基因在里氏木霉中终止转录的里氏木霉外切葡聚糖纤维二糖水解酶II终止子（TcbhII）；所述的里氏木霉外切葡聚糖纤维二糖水解酶II启动子的序列如序列表中SEQ ID NO:1所示序列的第7位至第980位；所述的里氏木霉外切葡聚糖纤维二糖水解酶II终止子的序列如序列表中SEQ ID NO:1所示序列的第1074位至第2169位；所述的控制外源蛋白在里氏木霉中分泌表达的信号肽的编码序列如序列表中SEQID NO:1所示序列的第981位至第1043位；所述的多克隆位点的序列如序列表中SEQ ID NO:1所示序列的第1040位至第1073位；其中，所述的信号肽的编码序列的末4位碱基同时也为所述的多克隆位点的序列的头4位碱基。