南方松树丛芽诱导及继代培养方法

摘要

本发明公开了一种南方松树丛芽诱导及继代培养方法，选择带0.5cm长下胚轴无菌苗顶芽为外植体，采用改良MS培养基+6-BA2.5-4.0mg·L-1+NAA0.05-0.1mg·L-1+蔗糖30000mg·L-1+琼脂3500mg·L-1+水解酪蛋白500mg·L-1诱导培养20-26d，再用改良MS培养基+NAA0.25-0.4mg·L-1或活性炭3000-5000mg·L-1+蔗糖30000mg·L-1+琼脂3500mg·L-1和改良MS培养基+6-BA1.0-3.0mg·L-1+KT0-1.0mg·L-1+NAA0-0.3mg·L-1+蔗糖30000mg·L-1+琼脂3500mg·L-1的不同配比培养基进行丛生芽伸长、继代增殖培养，重复N次培养方式继代培养，获得规模化继代芽。本方法的丛芽诱导率达97%以上，芽苗伸长快、活力旺盛，芽产量大，增殖系数达到6.8以上，能提供优质高效南方松苗造林，具有较好的经济效益和社会效益。

主权项

一种南方松树丛芽诱导及继代培养方法，其特征在于：包括外植体选择与处理、丛生芽诱导、丛生芽伸长、继代芽培养，获得规模化组织培养南方松树继代芽，其操作步骤如下：（1）外植体选择与处理：将松树种子消毒后，在无菌条件下进行种子萌发，然后截取带0.5 cm长下胚轴的无菌苗顶芽为外植体进行组织培养；（2）丛生芽诱导：将无菌外植体接种在诱导培养基中进行丛芽诱导，培养周期：20‑26 d，培养温度：24±1℃，光照培养时间：0‑16 h，光照强度：0‑2000 lx，获得丛生芽；（3）丛生芽伸长：将诱导出的丛生芽在伸长培养基中进行伸长培养，培养周期：14‑28 d，培养温度：24±1℃，光照培养时间：16 h，光照强度：1500‑2000 lx，获得丛生伸长芽；（4）继代芽培养：将单个切下伸长芽的顶芽接种到继代增殖培养基中进行增殖，培养周期：14‑21 d，培养温度：24±1℃，光照培养时间：16 h，光照强度：1500‑2000 lx，获得继代芽Ⅰ；将继代芽Ⅰ重复步骤（3）进行伸长，单个切下伸长的继代芽Ⅰ并分成顶芽和带侧芽芽段，然后在步骤（4）继代增殖培养基中继续增殖获得继代芽Ⅱ，将继代芽Ⅱ再重复步骤（3）和步骤（4），获得新的增殖继代芽；重复循环步骤（3）和（4），从而实现规模化增殖继代组培南方松树继代芽。