利用人骨髓间充质干细胞制备视网膜色素上皮细胞的方法

摘要

本发明公开了一种利用人骨髓间充质干细胞制备视网膜色素上皮细胞的方法，通过人骨髓间充质干细胞与视网膜色素上皮细胞非接触式共培养而使所述人骨髓间充质干细胞诱导分化为视网膜色素上皮细胞；与现有技术相比，本发明通过人骨髓间充质干细胞与视网膜色素上皮细胞非接触式共培养而使所述人骨髓间充质干细胞分化为视网膜色素上皮细胞，分化的视网膜色素上皮细胞具有原代视网膜色素上皮细胞的重要表型和生理功能，而且分化时间短、分化效率高、在培养过程中无诱导细胞的混杂污染。

主权项

一种利用人骨髓间充质干细胞制备视网膜色素上皮细胞的方法，其特征在于：将人骨髓间充质干细胞与原代视网膜色素上皮细胞非接触式共培养诱导所述人骨髓间充质干细胞分化；所述非接触式共培养包括以下步骤： a．接种人骨髓间充质干细胞于细胞培养孔板中，加入培养液，在37℃和5% CO2培养箱中放置培养至细胞贴壁，弃孔板中的培养液；所述人骨髓间充质干细胞采用第3‑6代传代细胞；所述接种人骨髓间充质干细胞采用的接种密度为每孔2×104细胞；所述培养液为含10%胎牛血清的DMEM/F12培养液； b．接种视网膜色素上皮细胞于Transwell小室中；所述视网膜色素上皮细胞为猪视网膜色素上皮细胞；所述接种视网膜色素上皮细胞采用的接种密度为每孔2×104细胞；所述Transwell小室使用的膜孔径为1.0 μm； c．将步骤b中的Transwell小室置于步骤a中的孔板中，加入培养液，形成非接触式共培养体系，在37℃和5% CO2培养箱中放置培养，并定期更换培养液至细胞分化；所述培养液为含20%胎牛血清的DMEM/F12培养液；所述加入培养液为向Transwell上室加入1份培养液，向Transwell下室加入3份培养液；所述定期更换培养液为放置培养5‑7天后首次更换培养液，首次更换后每2‑3天更换一次； d．将步骤c中分化的细胞进行消化传代；所述消化传代用胰酶按1：2消化传代。