重组蛋白的重折叠

摘要

提供了用于回收和纯化异源宿主细胞中所生成的重折叠的重组蛋白的方法，该方法包括在高pH缓冲液中重折叠所述蛋白质的步骤。

主权项

一种用于从原核细胞培养物中回收重折叠的重组蛋白的方法，其中所述重组蛋白是VEGF165，该方法包括下列步骤：(a)从所述原核细胞培养物中分离重组蛋白；(b)使所述蛋白质在第一缓冲溶液中溶解，所述第一缓冲溶液其pH大于9且包含(i)终浓度1M尿素、300mM精氨酸、10mM CHES、5mMEDTA，pH 11；或(i)终浓度1M尿素、300mM精氨酸、10mM TRIS、5mM EDTA，pH 11；(c)使所述溶解的蛋白质在第二缓冲溶液中重折叠，所述第二缓冲溶液其pH大于9但小于等于11且包含(i)终浓度1M尿素、15mM半胱氨酸、2mM DTT、100mM精氨酸、10mM CHES、5mM EDTA，pH 10；或(ii)终浓度1M尿素、15mM半胱氨酸、0.5‑2mM DTT、100mM精氨酸、10mM TRIS、5mM EDTA，pH 10且在室温以akLa＝0.001‑0.1min‑1通入空气或氧气达6‑24小时；并(d)回收所述重折叠的重组蛋白。