一种TRPC6蛋白的双抗体夹心ELISA检测方法和试剂盒

摘要

本发明提供一种TRPC6蛋白的双抗体夹心ELISA检测方法和试剂盒。该方法是用TRPC6蛋白单克隆抗体mAb-H8包被微孔板，封闭液封闭微孔板后，分别加入标准TRPC6多肽和待测样品的稀释液，再加入TRPC6蛋白多克隆抗体pAb-T和酶标二抗，洗涤后加底物显色，用酶标仪在490nm波长下测定OD值，制得标准TRPC6多肽的标准曲线，通过标准曲线计算待测样品中TRPC6蛋白浓度。本发明还提供了检测TRPC6蛋白的ELISA试剂盒。本发明的方法及试剂盒检测结果准确、稳定、灵敏度高，一次酶标实验即可快速检测不同组织细胞的TRPC6蛋白表达量，方便简捷、灵敏度高，充分体现了该方法的优越性。

主权项

一种TRPC6蛋白的双抗体夹心ELISA检测方法，其特征在于，包括如下步骤：用TRPC6蛋白单克隆抗体mAb‑H8包被微孔板，封闭液封闭微孔板后，分别加入标准TRPC6多肽和待测样品的稀释液，再加入TRPC6蛋白多克隆抗体pAb‑T和酶标二抗，洗涤后加底物显色，测定OD 值，计算待测样品中TRPC6蛋白浓度；所述TRPC6蛋白单克隆抗体mAb‑H8是由杂交瘤细胞株H8分泌后纯化得到；mAb‑H8的工作浓度为5~20μg/mL；所述TRPC6蛋白多克隆抗体pAb‑T是由TRPC6多肽‑KLH偶联物免疫小鼠后分离血清纯化得到的；TRPC6多肽的序列如SEQ ID NO：1所示；pAb‑T的工作浓度为2.5~10μg/mL；所述封闭液为5%脱脂奶粉37 ℃封闭1.5~2.0小时；或者，5%牛血清白蛋白37 ℃封闭1.0~1.5小时，或者5%胎牛血清37 ℃封闭1.5~2.0小时。