一种复合生防制剂及其制备方法和应用

摘要

本发明为一种复合生防制剂及其应用，涉及植物组织液的提取与自筛菌种的复配技术。本发明使用的自筛菌种MDCGTH18登记编号为CGMCC NO.2965。臭椿叶、夹竹桃花提取液与该菌株经复配后，能有效抑制多种病菌的繁殖，同时能在植物体内诱发防卫反应，使植物本身具有抗病能力，对多种植物病原真菌、细菌及线虫都有很强的抑菌活性，可用于多种植物病害的生物防治，具有抑菌活性强，且抗菌谱广优异效果。

主权项

一种复合生防制剂，其特征在于，活性组分为三种组成：臭椿植物组织提取液、夹竹桃植物组织提取液、以及哈茨木霉(Trichoderma harzianum)复合菌种MDCGTH18的发酵培养物，其重量用量比例为：臭椿植物组织提取液：夹竹桃植物组织提取液：哈茨木霉复合菌种MDCGTH18发酵培养物＝1∶2∶1；所述哈茨木霉(Trichoderma harzianum)复合菌种MDCGTH18已在中国微生物保藏管理委员会普通微生物中心进行保藏，保藏日期为2009年3月19号，保藏编号为CGMCCNO.2965；所述哈茨木霉(Trichoderma harzianum)复合菌种MDCGTH18的发酵培养物的发酵培养方法如下：①斜面培养：采用固体PDA培养基，将哈茨木霉MDCGTH18复合菌种接种在试管培养基上，28℃培养2～3天；②茄瓶培养：采用液体PD培养基，将试管菌种接种在茄瓶液体培养基中，置于摇床上28℃振荡培养3～4天；③液体菌种培养物：采用种子培养基：玉米粉2％，葡萄糖0.5％，豆饼粉1％，磷酸氢二钾0.2％，磷酸二氢钾0.3％，碳酸钙1％，pH6.0；在121℃灭菌40min，将1～2个茄瓶的种子用无菌水洗下，接种于150立升的种子罐内，30℃培养，通气量1∶0.6～0.8，搅拌速度为200r/min，培养时间为36～48h；④固体菌种培养物：采用固体培养基∶麸皮∶稻壳∶玉米粉＝7∶1∶2，含水量为70％，pH6.0；121℃灭菌40min后，以循环水冷却，在接 种器内将液体菌种与固体培养基混合均匀，接种量为5～10％，接种完毕转移到固体培养室内培养，30℃培养，培养时间为5～7天，最终获得菌体密度为108～109个/g的发酵培养物，用于复配；所述臭椿植物组织提取液的制备方法如下：①臭椿采集：于四月份分别收集选取无虫害、无菌感染、无腐烂的臭椿的叶、皮，洗去浮尘，晾干备用；②烘干：将采集到的臭椿叶、皮原料分别置于干燥箱，50℃烘干24h；③粉碎：将烘干后的臭椿叶、皮按(50～80)∶(20～50)重量比例混合，用破碎机粉碎，过20目分样筛；④提取：以95％乙醇为提取剂，按每100L乙醇处理6kg干燥臭椿粉的配料比例，将臭椿叶、皮混合粉末投入预热至50℃的提取剂乙醇中，搅拌均匀并自然冷却至25℃，然后在300r/min搅拌下，浸泡提取24小时；⑤过滤：过滤除去固体残渣，所得臭椿植物组织提取液用于复配；所述夹竹桃植物组织提取液制备方法如下：①夹竹桃采集：分别收集选取无虫害、无菌感染、无腐烂的夹竹桃的花、叶、皮，洗去浮尘，晾干备用；②烘干：将采集到的夹竹桃的花、叶、皮分别置于干燥箱，于50℃烘干24h；③粉碎：将烘干后的夹竹桃的花、叶、皮按(40～50)∶(30～40)∶(20～30)重量比例混合，用破碎机粉碎，过20目分样筛；④提取：以95％乙醇为提取剂，按每100L乙醇处理6kg干燥夹竹桃粉的配料比例，将夹竹桃的花、叶、皮混合粉末投入预热至50℃的提取剂乙醇中，搅拌均匀并自然冷却至25℃，然后在300r/min搅拌下，浸泡提取24小时；⑤过滤：过滤除去固体残渣，所得夹竹桃植物组织提取液用于复配。