一种肝素浓度的测定方法

摘要

本发明涉及一种肝素浓度的测定方法，其包括（1）激活的FX（FXa）的制备：通过基因工程的方法制备纯度在50%以上的人FXa或牛FXa，所述FXa溶于Tris缓冲液中并加入少量生理盐水NaCl和牛白蛋白形成FXa溶液；（2）制备标准曲线；（3）样品肝素浓度的测定：取用肝素治疗的病人的血浆作为样品，将过量的步骤（1）制备的FXa溶液与样品混合1min~15min，然后加入一定量的发色底物，混合均匀，作用一定时间后，用所述专用仪器测定上述样品并于一定波长处读取吸光度，根据标准曲线计算所述样品中肝素浓度。本发明根据基因工程合成的FXa克服了原有方法的缺点，制备方便，反应特异性更好，制品稳定性更好，重复性更佳。另外本发明测定方法工艺简单、稳定，可操作性强。

主权项

一种肝素浓度的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）激活的FX（FXa）的制备：通过基因工程的方法在表达载体中表达，制备纯度在50%以上的初步纯化的人FXa或牛FXa，所述FXa溶于Tris缓冲液中并加入少量生理盐水NaCl和牛白蛋白形成FXa溶液；（2）标准曲线的制备：A、将一定量的肝素加入至正常人血浆中，并稀释成一定浓度的已知肝素浓度的标准液，在所述标准液中加入发色底物，然后用专用仪器进行测试并于一定波长处读取吸光度；B、按步骤（A）的方法，配置多个不同浓度的已知肝素浓度的标准液，在各所述标准液中加入发色底物，然后用所述专用仪器测试各浓度标准液并于所述一定波长处读取吸光度，得到多个吸光度；C、根据上述多个肝素标准液浓度与测得的对应吸光度绘制标准曲线；（3）样品肝素浓度的测定：取用肝素治疗的病人的血浆作为样品，将过量的步骤（1）制备的所述FXa溶液与所述样品混合1min~15min，然后加入一定量的发色底物，混合均匀，作用一定时间后，用所述专用仪器测定上述样品并于所述一定波长处读取吸光度，根据标准曲线计算所述样品中肝素浓度。