绵羊Noggin基因的克隆和慢病毒表达载体的构建方法

摘要

本发明的绵羊Noggin基因的克隆和慢病毒表达载体的构建，确定绵羊Noggin基因编码区的全序列；设计克隆Noggin基因全长cDNA的PCR引物，上游引物N1：ATAGGATCCGGAGGCATGGAGCGCTGCCCCAG，下游引物N2：CGACTCGAGCTAGCACGAGCACTTGCACTC；其引物酶切位点外侧含有保护碱基ATA和CGA；将目的基因克隆于pET41a原核表达载体中，获得pET41a-Noggin重组载体；设计将目的基因定向克隆与慢病毒表达载体的引物：上游引物P1：ATAGGATCCGGAGGCATGGAGCGCTGCCCCAG，下游引物P2：CGACTCGAGCTAAGCGTAGTCTGGGACGTCGTATGGGTAGCACGAGCACTTGCACTC(包含HA抗体标签)；将目的基因定向克隆于pLEX慢病毒载体中，获得Noggin基因慢病毒载体，生产重组病毒，生产转Noggin基因绵羊；通过PCR方法鉴定其转基因羊。

主权项

绵羊Noggin基因的克隆和慢病毒表达载体的构建方法，其特征在于：确定绵羊Noggin基因编码区的全序列；设计克隆Noggin基因全长cDNA的PCR引物，上游引物N1：ATAGGATCCGGAGGCATGGAGCGCTGCCCCAG，下游引物N2：CGACTCGAGCTAGCACGAGCACTTGCACTC；上下游引物酶切位点外侧含有酶切的保护碱基ATA和CGA；将目的基因定向克隆于pET41a原核表达载体中，获得pET41a‑Noggin重组原核表达载体；设计将目的基因定向克隆与慢病毒表达载体的引物：上游引物P1：ATAGGATCCGGAGGCATGGAGCGCTGCCCCAG，下游引物P2：CGACTCGAGCTAAGCGTAGTCTGGGACGTCGTATGGGTAGCACGAGCACTTGCACTC；将目的基因定向克隆于pLEX慢病毒表达载体中，获得Noggin基因慢病毒载体。