制备致病性维氏气单胞菌卵黄抗体的方法

摘要

本发明公开了一种制备致病性维氏气单胞菌卵黄抗体的方法，包括制备菌苗、免疫程序、卵黄液的预处理、卵黄粉的制备等步骤。本发明易操作，效果好，对免疫后每间隔7d收集的鸡蛋进行效价测定，第四次免疫后ELISA测定的效价可达1：12560，进一步制成的卵黄抗体粉效价不变。

主权项

一种制备致病性维氏气单胞菌卵黄抗体的方法，其特征是：包括下列步骤：（1）将保藏编号为CCTCC No：M2012154的暗纹东方鲀源致病性维氏气单胞菌（Aeromonas veronii）SY‑R2划线接种大豆酪蛋白琼脂培养基平板，37℃培养24h，挑取单菌落涂布于直径15cm的TSA平板，于37℃培养20h；用无菌PBS洗下菌苔，测定并调整菌液浓度为2.5×1010CFU/mL；纯检合格后按0.5%福尔马林液37℃灭活24h，无菌检验合格后供制备抗原；每5重量份灭活菌液加入灭菌的氢氧化铝胶1重量份，加入相当于灭活菌液和氢氧化铝胶总重量0.01%的硫柳汞防腐，得到菌苗；（2）免疫程序：28周龄罗曼蛋鸡进行翅静脉采血作为对照血清，开产后收集鸡蛋作为实验对照；开产后第3天，用步骤（1）制备的菌苗胸肌多点注射免疫，剂量0.5mL/只；首次免疫后1周进行第二次免疫，免疫剂量1.0mL/只；第二次免疫后每隔20d加强免疫，连续免疫2次，免疫剂量均为1.0mL/只；第四次免疫后40d，再进行免疫，免疫剂量为2.0mL/只；从首次免疫开始，每次免疫后7天翅静脉采血分离血清，并收集所有鸡蛋，对免疫后每间隔7d收集的鸡蛋进行效价测定；用微量凝集法初步测定免疫鸡血清和卵黄中抗体的有无；（3）卵黄液的预处理：收集第四次免疫后鸡蛋，用清水刷拭干净后浸于0.5%新洁尔灭中消毒、凉干，于无菌条件下分离出卵黄， 加入1.5倍体积的生理盐水，高速匀浆制备乳浊液；（4）卵黄粉的制备：将经步骤（3）预处理的卵黄液进行喷雾干燥，制得卵黄粉，其中IgY即抗暗纹东方鲀源致病性维氏气单胞菌卵黄抗体；步骤（2）对免疫后每间隔7d收集的鸡蛋，无菌条件下分离出卵黄，80g/L聚乙二醇‑8000一步法提纯卵黄抗体，ELISA测定抗体效价，第四次免疫后ELISA测定的卵黄抗体效价为1：12560；步骤（4）中喷雾干燥的进风温度为120℃‑140℃，出风温度为68℃‑72℃。