抗泥鳅病原霍乱弧菌的卵黄抗体灭活疫苗的制备方法

摘要

本发明是一种抗泥鳅病原霍乱弧菌的卵黄抗体灭活疫苗的制备方法，先将泥鳅病原霍乱弧菌NQ1菌株灭活、离心得灭活菌体；然后制得黄芪浸出液；再由白油、硬脂酸铝、司班80制得油相，灭活菌体与黄芪浸出液混合制得疫苗水相；最后将油相和水相按体积比2:1混合乳化研磨5min，制得黄芪和白油为联合佐剂的泥鳅病原霍乱弧菌NQ1油乳剂灭活疫苗。本发明泥鳅病原霍乱弧菌油乳剂灭活疫苗，可以用于免疫成年产蛋鸡，进而得到抗泥鳅病原霍乱弧菌的高免卵黄抗体，能增强泥鳅对病原霍乱弧菌的免疫力，预防与治疗泥鳅由病原霍乱弧菌引起的疾病，增加泥鳅养殖的产量，提高泥鳅养殖生产的经济效益。解决目前泥鳅养殖生产过程中易发生病原霍乱弧菌所引起的细菌性疾病的问题。

主权项

一种抗泥鳅病原霍乱弧菌的卵黄抗体灭活疫苗的制备方法，其特征在于：它以经甲醛溶液灭活后的泥鳅病原霍乱弧菌（Vibrio cholerae) NQ1作为免疫原，以白油、司班80、硬脂酸铝作油乳剂，以黄芪浸出液作为免疫增强剂，乳化制备成油乳剂灭活疫苗；其具体步骤如下：（1）将泥鳅病原霍乱弧菌NQ1菌株接种在普通营养琼脂肉汤培养基上，28‑30℃摇床培养24h，加入体积终浓度0.3%的甲醛28℃灭活48h，离心得灭活菌体；（2）取黄芪用蒸馏水浸泡30‑60min后煎煮，过滤，浓缩至终浓度为原药1g/mL，得黄芪浸出液；（3）将白油加热至50‑55℃，加入硬脂酸铝，硬脂酸铝与白油的重量体积比为1‑3 g：100 ml，继续加热至65‑70℃，加入司班80，司班80与白油的体积比为5‑7：100，直至终温度115‑120℃，维持15‑20 min，制得油相，冷却备用；（4）将灭活菌体与黄芪浸出液混合，制得疫苗水相；水相中泥鳅病原霍乱弧菌NQ1免疫原为1012cells/mL，黄芪浸出液为1g/mL，水相中还加入了终体积浓度为4%的吐温80；（5）将油相和水相按体积比2:1混合乳化研磨5min，制得黄芪和白油为联合佐剂的泥鳅病原霍乱弧菌油乳剂灭活疫苗。