厚叶岩白菜离体培养和快速繁殖的方法

摘要

本发明厚叶岩白菜离体培养和快速繁殖的方法，选择带顶芽的新鲜根状茎做为无菌外植体，接种到初代培养基中，进行初代培养；将初代培养的无菌苗转入增殖培养基，增殖培养基为MS+BA0.5~3.5mg·L-1+NAA0.2~1.5mg·L-1+VC0.5~5.0mg·L-1+蔗糖25~35g·L-1+琼脂4~8g·L-1，诱导不定芽；将诱导出的丛生芽分切后，转移至壮苗培养基，进行壮苗培养；试管苗分切后，转移至生根培养基中，生根培养基：1/2MS+NAA1.5~4.5mg·L-1+IBA0.5~2.5mg·L-1+VC0.5~5.0mg·L-1+蔗糖15~25g·L-1+琼脂4~8g·L-1；生根试管苗清洗移至基质中栽种。本发明年繁殖系数提高到1：600000，成本降至每株2~3元，且不受季节限制，环境易控，减少变异植株的产生，种苗品质高，一致性好。

主权项

一种厚叶岩白菜离体培养和快速繁殖的方法，取厚叶岩白菜外植体在无菌环境下，经初代培养、增殖培养、壮苗培养和生根培养获得再生植株，进行栽种，其特征在于按下列步骤进行：所述的初代培养：选择并清洗、消毒处理带顶芽的新鲜根状茎获得起始的无菌外植体，在无菌环境的显微镜下修切为0.2~0.5mm大小的芽点，接种到初代培养基上，进行初代培养，获得初代培养的无菌苗，所述的初代培养基为：MS+6‑BA0.15~0.25mg•L‑1+NAA0.15~0.25mg•L‑1+VC0.5~5.0mg•L‑1+蔗糖25~35g•L‑1+琼脂4~8g•L‑1；所述的增殖培养：是将初代培养的无菌苗转入增殖培养基，诱导不定芽，该增殖培养基为：MS+6‑BA 0.5~3.5mg•L‑1+NAA0.2~1.5mg•L‑1+VC0.5~5.0mg•L‑1+蔗糖25~35 g•L‑1+琼脂4~8 g•L‑1，诱导出丛生芽；所述的壮苗培养：将诱导出的丛生芽分切后，转移至壮苗培养基，进行壮苗培养，获得高度为1.5cm以上的试管苗，所述的壮苗培养基为：MS+6‑BA0.15~0.25mg•L‑1+IBA0.15~0.25mg•L‑1+VC0.5~5.0mg•L‑1+蔗糖25~35 g•L‑1+琼脂4~8 g•L‑1；所述的生根培养：将经壮苗培养生长到1.5cm以上的试管苗分切后，转移至生根培养基中，获得生根试管苗，该生根培养基为1/2MS+NAA1.5~4.5mg•L‑1+IBA0.5~2.5 mg•L‑1+ VC 0.5~5.0mg•L‑1 +蔗糖15~25g•L‑1+琼脂4~8g•L‑1；最后，对所得的生根试管苗进行清洗，移至珍珠岩、草炭土、腐殖质的混合基质中进行栽种，生根试管苗移栽入混合基质的营养成分为草炭土:珍珠岩:腐殖质＝2:1:1；其中，获得无菌外植体的方法是：取厚叶岩白菜包含顶芽生长点的根状茎，切取成为长度0.5~1cm，直径为0.3~0.6cm的圆柱体，并使顶芽生长点位于圆柱体的中央，保留两片叶柄基部保护生长点，用洗洁精擦洗表面流水冲洗20分钟，再进行消毒处理，并将消毒处理后的茎尖在无菌环境的显微镜下继续修切为0.2~0.5mm大小的芽点；对外植体清洗、消毒处理方法是：先用72%浓度的酒精消毒30~60s，再用无菌水冲洗3~4次，然后用加有2~4滴吐温80的含0.5~5.0mg•L‑1VC的0.1~0.2%的升汞液浸泡15~30分钟，用含0.5~5.0 mg•L‑1VC无菌水冲洗至无残留，得到无菌外植体。