一种产耐高温α-淀粉酶菌种的优化方法

摘要

本发明属于产酶菌种领域，具体涉及一种产耐高温α-淀粉酶-地衣芽孢杆菌10181的优化方法。一种产耐高温α-淀粉酶菌种的优化方法，包括下述的步骤：a.菌种的活化培养；b.菌种的优化；c.菌种的扩培；d.发酵后提取。采用本发明的优化方法对产耐高温α-淀粉酶-地衣芽孢杆菌10181的进行优化，该菌种所产的耐高温α-淀粉酶其酶活达到11000u/ml，耐受温度高达110℃，而采用现有方法生产的耐高温α-淀粉酶其酶活一般在2500u/ml，耐受温度为95℃，因此，无论是从酶活还是从对温度的耐受能力上看，都要优于现有方法生产的α-淀粉酶，而且采用本发明的优化方法大大的降低了酶的生产成本。

主权项

一种产耐高温α‑淀粉酶菌种的优化方法，包括下述的步骤：a. 菌种的活化培养：将冷冻管保存的地衣芽孢杆菌10181菌种拿出活化，活化培养基：牛肉膏0.5～0.7%、蛋白胨1.0～1.2%、氯化钠0.3～0.5%、琼脂1.8%、余量为水，加热以上的组份至其溶解，调pH在6.8～7.2之间，装瓶包扎，在0.1Mpa下加热到121℃灭菌20～30min，冷却到45～50℃在无菌条件下倒平板或摆斜面，备用；由冷冻管菌种划线接种于平板培养基，38℃，培养30～40h；挑取单菌落,36～38℃，培养30～40h，保存备用； b.菌种的优化：将保存的菌种划线于淀粉平板培养基上：蛋白胨1～2%，酵母粉0.1～0.5%、牛肉粉0.3～0.7%、玉米淀粉0.8～1.8%、 葡萄糖0.2～0.4%、琼脂1.5～1.8%、余量为水，调pH6.7～7.0，在121℃下灭菌20～30min，36℃～38℃培养30～40h，选出淀粉水解圈大的单菌落，来进行种子扩培；c.菌种的扩培：玉米淀粉5～10%，豆饼粉2～4%，硫酸铵0.5～1%，氯化钙0.02～0.05%，磷酸氢二钾1.3～2%，磷酸二氢钾1.3～2%，消泡剂0.02～0.05%、余量为水，调pH6.5～7.0，在121℃下灭菌40 min，将液体摇瓶种子液接入种子罐培养基中,接种量为1～2.5%，36℃～42℃培养40h；d.发酵后提取：发酵结束后，发酵液脱色、经过板框过滤后，再经过超滤循环，制得液体酶制剂；脱色投料比为发酵液：活性炭＝90～100：1，搅拌转速：60～80rpm，脱色时间：1～1.5h；板框进料待出滤液后，先启动滤液上料泵打回流，滤液澄清后，打开袋式过滤器前的进料阀门，关闭回流阀，将滤液打往超滤循环罐；超滤浓缩工序：清洗：3～4bar条件下内循环10分钟，超滤：压力稳定4～5bar。