促甲状腺激素定量检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种促甲状腺激素定量检测试剂盒，它包括包被有抗促甲状腺激素单克隆抗体的磁微粒混悬液、促甲状腺激素系列校准品、辣根过氧化物酶标记的抗促甲状腺激素单克隆抗体、发光底物A液、发光底物B液及浓缩洗液；本发明还公开了该试剂盒的制备方法。本发明的优点在于采用双抗体夹心的一步法反应模式，从大量的活性材料中优选出一对特异性较高、亲和力较强的单克隆抗体分别作为包被抗体和酶标记抗体，使得本试剂盒诊断灵敏度、精密性和检测范围明显优于同类试剂盒，反应时间大大缩短，同时本发明采用抗促甲状腺激素单克隆抗体与免疫磁微粒的偶联方法，偶联效率较高，结合牢固，工艺稳定，在提高产品性能的同时，大大降低了产品成本。

主权项

一种促甲状腺激素定量检测试剂盒，它包括包被有抗促甲状腺激素单克隆抗体的磁微粒混悬液、促甲状腺激素系列校准品、辣根过氧化物酶标记的抗促甲状腺激素单克隆抗体、发光底物A液、发光底物B液及浓缩洗液；所述试剂盒的制备方法包括下述步骤：第一步，包被有抗促甲状腺激素单克隆抗体的磁微粒混悬液的制备根据使用量取羧基磁微粒，用过量的1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺和N‑羟基琥珀酰亚胺在酸性条件下进行活化，活化完成后，加磁场，静置使磁微粒与液体分开，弃去上清，用pH为7.6的0.01M的PBS缓冲液洗涤以洗去多余的活化剂；加入抗促甲状腺激素单克隆抗体，使其浓度为 2μg/mg磁微粒，在酸性条件下震荡反应；反应结束后加磁场，静置使磁微粒与液体分开，弃去上清，用含有1%牛血清白蛋白的0.01M的PBS缓冲液进行封闭，并加入封闭液以保存磁微粒，使磁微粒的最终浓度为0.5mg/ml；将该磁微粒混悬液置于2‑8度保存，以备使用；第二步，促甲状腺激素系列校准品的制备用含有1%‑3% BSA和0.1‑0.3% PC300的Tris‑NaCl缓冲液将促甲状腺激素纯品配制成标示浓度为0μIU/ml、0.1μIU/ml、0.5μIU/ml、2μIU/ml、10μIU/ml、50μIU/ml、100μIU/ml的一系列校准品；第三步，辣根过氧化物酶标记的抗促甲状腺激素单克隆抗体的制备将鼠抗促甲状腺激素单克隆抗体上的羧基与辣根过氧化物酶分子的氨基经1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺的作用缩合为酰胺化合物 ，透析后即得促甲状腺激素酶标抗体；在标记好的溶液中，等比加入甘油‑20度保存备用；第四步，发光底物A液、发光底物B液及浓缩洗液的配制发光底物A液由0.2M Tris‑Hcl、0.15mM Luminol、0.59mM羟基香豆素、0.35mM没食子酸配制而成；发光底物B液由0.85mM氨基酸氧化酶、0.8% Tween 20、0.5mM DTPA、0.12mM维生素C配制而成；浓缩洗液由NaH2PO4·2H2O 4.06g, Na2HPO4·12H2O 62.32g,Tween20 2‑10ml , 蒸馏水 1000ml配制而成。