发明名称 一种利用膨胀床富集分离螺旋藻藻蓝蛋白的方法
摘要 一种利用膨胀床富集分离螺旋藻藻蓝蛋白的方法,属于生化分离工程技术领域。本发明步骤为:螺旋藻破壁液的制备;JDN-8微球在膨胀床中富集螺旋藻破壁液中的藻蓝蛋白;用破壁提取剂从膨胀床中洗出细胞碎片和其它杂质;洗脱分离藻蓝蛋白;洗脱液经冷冻干燥,最终获得一定纯度的藻蓝蛋白;蛋白回收率可达70~80%。该方法简单,对螺旋藻破壁液直接使用JDN-8微球在膨胀床中进行富集分离,无需去除破壁液的细胞碎片和其它杂质,降低了制备过程中化学试剂使用量,简化了纯化过程的步骤,使用JDN-8微球膨胀吸附分离得到的藻蓝蛋白具有较高纯度,光谱纯度达到A620/A280>2.0。原料采用螺旋藻鲜藻或干藻粉,从而提供了一种解决螺旋藻资源高值规模化利用的技术方法。
申请公布号 CN103304649A 申请公布日期 2013.09.18
申请号 CN201210069200.3 申请日期 2012.03.16
申请人 江南大学;大丰市赐百年生物科技有限公司 发明人 王峰;郭静;高志刚
分类号 C07K14/405(2006.01)I;C07K1/16(2006.01)I 主分类号 C07K14/405(2006.01)I
代理机构 代理人
主权项 一种利用膨胀床富集分离螺旋藻藻蓝蛋白的方法,其特征在于步骤为:螺旋藻破壁液的制备;JDN‑8微球在膨胀床中富集螺旋藻破壁液中的藻蓝蛋白;用破壁提取剂从膨胀床中洗出细胞碎片和其它杂质;洗脱分离藻蓝蛋白;洗脱液经冷冻干燥,最终获得一定纯度的藻蓝蛋白。(1)螺旋藻破壁液的制备:用水或磷酸缓冲液作提取剂,磷酸缓冲液的浓度为25~100mmol/L,藻粉或鲜藻与提取液的固液比为1∶50~1∶150,搅拌均匀后,置于‑10℃~‑20℃下冷冻一定时间后,37℃融解,如此反复冻融4‑6次,融化后获得的破壁液;(2)JDN‑8微球在膨胀床中膨胀富集破壁液中的藻蓝蛋白:在400mm×16mm玻璃柱内(液体分布器为200目丝网)加入10g的JDN‑8微球,从柱底注入提取剂,使微球上浮形成膨胀床,微球床层的膨胀率为1.5~3.0,微球膨胀床层稳定20分钟后,在柱底将提取剂迅速切换为螺旋藻破壁液注入,破壁液的蛋白质浓度为0.2~0.5mg/ml,当柱顶流出液的蛋白质浓度为柱底注入破壁液的蛋白质浓度的70~80%时,膨胀床中JDN‑8微球的吸附量达到饱和,停止注入破壁液;。(3)用破壁提取剂从膨胀床中洗出细胞碎片和其它杂质:在饱和吸附藻蓝蛋白后,将JDN‑8微球膨胀床的注入流体从破壁液迅速切换成提取液,微球床层的膨胀率与步骤2中相同,冲洗去除柱中的细胞碎片和其它杂质,直到柱顶流出液在550nm处的吸光度值A550等于零;(4)洗脱分离藻蓝蛋白:将去除细胞碎片和其它杂质的膨胀床静置,使床中的JDN‑8微球自然沉降,将多余的液体放出,使液面刚好与柱床表面一致。从柱顶注入pH值为7.0、浓度为500~1000mmol/L的磷酸缓冲液,流速为20~100ml/min,从JDN‑8型微球上洗脱收集富含藻蓝蛋白的洗脱液段;(5)冷冻干燥:将收集的藻蓝蛋白的洗脱液冷冻干燥,得到纯度A620/A280>2.0的藻蓝蛋白粉末。
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