一种检测低含量基因突变的PCR扩增方法及其应用

摘要

本发明涉及一种检测低含量基因突变的PCR扩增方法及其应用。揭示了一种检测低含量基因突变样本中基因突变的方法，该方法可应用于选择性扩增较高野生型模板背景下的突变型基因，使PCR产物中突变型基因得到富集，从而实现对低含量基因突变的有效检测。本发明为基因突变检测提供了一种简单、廉价、高效且灵敏度高、结果稳定的方法。

主权项

一种检测低含量基因突变样本中基因突变的方法，其特征在于，所述方法包括：(1)以待测基因为模板，以分别互补于突变位点上游和下游的一对扩增引物进行PCR扩增，同时加入覆盖突变位点的抑制性寡核苷酸，其中，所述抑制性寡核苷酸的特征是：(a)序列中相应于待测突变位点的碱基位于寡核苷酸的中部；(b)5’或3’端附近位置存在1‑4个与野生型基因中相应碱基不配对的碱基，其它碱基与野生型基因中相应碱基配对；(c)其3’末端缺少形成磷酸二酯键的羟基；其中，所述扩增引物中，一条引物位于所述抑制性寡核苷酸5’端上游，且其3’端有2‑10个碱基与所述抑制性寡核苷酸的5’端2‑10个碱基互补于野生型基因模板上相同的位置；另一条引物位于所述抑制性寡核苷酸3’端下游，且其与所述抑制性寡核苷酸互补于野生型基因模板上不同的位置；和(2)对(1)的PCR扩增产物进行序列分析和/或序列鉴定，确定待测基因是否发生突变。