花生根尖细胞染色体有丝分裂中期的制片方法

摘要

本发明涉及一种花生根尖细胞染色体有丝分裂中期的制片方法，包括选取花生根尖，用对二氯苯浸泡预处理；将根尖放入卡诺氏固定液中室温处理；用醋酸浸泡，切取分生区根尖置于载玻片上，在盖玻片敲击使细胞分散，火烤解离软化细胞壁，用滤纸吸去多余醋酸；将处于有丝分裂中期、染色体平整分散细胞的制片冰冻，揭开盖玻片，将载玻片脱水；染色分带或荧光原位杂交。本发明得到的制片细胞平整、染色体分散，且居分裂中期的细胞较多；用醋酸介质直接压片，试剂对染色体影响小，易于操作控制，步骤简单，制片效率高。不仅适用于花生，也适用于芝麻、水稻、玉米、大豆、青豆或番茄等多种植物，具有良好的可操作性。

主权项

一种花生根尖细胞染色体有丝分裂中期的制片方法，包括预处理步骤，固定步骤并使用卡诺式固定液进行固定，压片步骤，其特征是：还包括冰冻揭片步骤，染色体染色分带或荧光原位杂交，该方法具体步骤如下：（1）预处理：选取长10‑15 mm、粗0.8‑1.2 mm的新鲜花生根尖，用对二氯苯饱和水溶液室温浸泡处理； （2）固定：将花生根尖放入卡诺氏固定液中，室温处理12‑24h，放入‑20℃冰箱中，待用；（3）醋酸压片：取固定好的花生根尖，用体积浓度为45%的醋酸浸泡30‑60秒，待根尖膨胀饱满后，切取分生区根尖0.3‑0.6 mm置于载玻片上，滴一滴所述醋酸，盖上盖玻片，调整根尖至盖玻片正中位置，用双面刀片垫起盖玻片一角，用解剖针垂直在盖玻片中央敲击一下，再在盖玻片上根尖四周垂直敲击5‑8次，使材料细胞分散，然后将载玻片放在酒精灯的外焰火烤解离软化细胞壁，火烤时间以盖玻片上雾状散开为宜，用滤纸垫在盖玻片上吸去多余醋酸，用拇指垂直向下压盖玻片，然后在相差显微镜下进行观察；（4）冰冻揭片：将处于有丝分裂中期、染色体平整分散细胞的制片放置于‑70~‑80℃的超低温冰箱中冰冻12‑24h，用双面刀片快速揭开盖玻片，将载玻片放入无水乙醇中脱水12‑24h，最后吹干无水乙醇，待用；（5）染色体染色分带或荧光原位杂交。