一种组织工程人角膜基质载体支架及其制备方法

摘要

本发明涉及一种利用海水鱼类胶原蛋白制备组织工程人角膜基质载体支架的方法，是采用非酶解鳕鱼皮胶原蛋白冻干粉充分溶解于盐酸中，离心去除沉淀后将上清液分装入培养板孔中冻干，加入含硫酸软骨素的1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺交联剂进行交联，用碱性Na2HPO4溶液稳定交联效果后，先后用2M NaCl、1M NaCl和蒸馏水清洗，冻干后即可作为组织工程人角膜基质的载体支架使用。本发明工艺科学合理，所制备的载体支架可用于批量生产，满足组织工程人工角膜基质规模化重建对载体支架的大量需求，为人角膜基质病盲通过临床角膜移植和重见光明创造条件，且此载体支架制备以及应用于组织工程人工角膜基质体外重建和临床治疗的成本低。

主权项

一种组织工程人角膜基质载体支架，其特征在于所述的载体支架是以鱼皮胶原蛋白复合硫酸软骨素制备出的，其中鱼皮胶原蛋白的质量百分比为20%‑40%，硫酸软骨素的含量为60%‑80%；所述的载体支架的制备方法包括如下步骤：1）将海水鱼类非酶解鱼皮胶原蛋白冻干粉溶解于盐酸中制成干粉溶液，离心过滤后加入到培养孔中冷冻干燥冻干；步骤1）的干粉溶液中又添加了质量百分比为0.05%‑0.1%的IV型胶原蛋白和质量百分比0.05‰‑0.1‰的纤连蛋白；2）将N‑羟基琥珀酰亚胺NHS溶解于2‑吗啉乙磺酸‑40%乙醇溶液中，制成 NHS溶液，再加入1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨丙基)‑碳化二亚胺溶液混匀制成交联剂溶液，最后加入硫酸软骨素，制成含硫酸软骨素的交联剂溶液；3）向含有海水鱼类非酶解鱼皮胶原蛋白冻干粉的培养孔中加入含硫酸软骨素的交联剂溶液，于室温下交联处理后，用Na2HPO4溶液清洗稳定交联效果；再用NaCl溶液清洗去除交联剂；最后，用蒸馏水清洗冻干后完成支架的制备。