一种南方红豆杉腋芽离体诱导培养生产紫杉醇的方法

摘要

一种在离体条件下诱导南方红豆杉腋芽萌发然后进行培养生产提取紫杉醇的方法，是在WPM基本培养基的基础上，将990mg/L的K2SO4用（800-1000）mg/L的(NH4)2SO4替换，得到改良的WPM基本培养基，并附加0.01-4.5mg/L的TIBA。然后从南方红豆杉数木上剪取当年生嫩梢，剪切成2.5cm的小茎段，消毒灭菌后接种于改良的WPM基本培养基上，于人工气候箱中光培养和暗培养交替培养，培养温度：白天为（25±1）℃，晚上(20±1)℃，光照强度：1500lx，相对湿度80%。在WPM+(0.01-4.5)mg/LTIBA快速成功诱导出了腋芽。利用此方法,可实现南方红豆杉腋芽的大规模、短周期、高繁殖率、低成本的工厂化生产。可在15天左右诱导出芽，诱导率为100%；用本方法诱导产生的南方红豆杉腋芽芽体粗而短，颜色鲜绿。采用本方法获得的芽中紫杉醇的含量50天可达0.0042%，较天然芽中含量高。

主权项

一种在离体条件下诱导南方红豆杉腋芽萌发然后进行培养生产提取紫杉醇的方法，包括以下步骤: （1）从南方红豆杉树木上剪取当年生嫩梢，摘除叶片，剪切成2～3 cm长的小茎段；（2）烧杯中加水，每500mL水中添加0.5g洗衣粉，搅拌均匀，然后将剪切好的小茎段放入烧杯搅拌清洗30min，取出后用自来水冲洗2h，然后转入无菌超净工作台，用70～75%的酒精浸泡消毒30s，无菌水清洗4次，再用0.1～0.25%的HgCl2溶液浸泡消毒8min，无菌水清洗6次，于超净工作台内晾干表面水后备接种用；（3）将步骤（2）已备好外植体的形态学下端插入附加2.0～3.5mg/L TIBA的改良WPM培养基中进行腋芽诱导培养；（4）将步骤（3）已接种培养瓶置于人工气候箱中进行培养，培养温度：白天25±1℃，晚上20±1 ℃；进行12h交替培养，光照强度：1500lx，相对湿度80±5%；（5）培养50天后收获芽，检测芽中紫杉醇的含量，生产提取紫杉醇；步骤（3）中所述的改良WPM基本培养基，是在WPM基本培养基的基础上，将990mg/L的K2SO4用800～1000mg/L的(NH4)2SO4替换。