一种DNA明胶纳米微凝胶防伪涂料制备方法

摘要

一种DNA明胶纳米微凝胶防伪涂料制备方法，先将DNA与明胶溶液混合，使用沉淀剂沉淀，再交联固化得到微凝胶使DNA包裹在含水的明胶纳米微凝胶网格中，然后将此明胶纳米微凝胶按照一定比例混入涂料中，制备得到一种保存周期长、结构稳定、易于检测、天然无毒的防伪涂料；由于DNA的未知性和扩增性，根据特定的DNA组成设计出引物，通过聚合酶链式反应（以下简称PCR）扩增放大数百万倍，通过电泳分析便可将所含DNA检测出来，达到防伪的目的。

主权项

一种DNA明胶纳米微凝胶防伪涂料制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、从泡桐树叶、小牛胸腺或大肠杆菌DH5αDNA中，通过聚合酶链式反应（PCR），扩增一段长度为400‑900bp的DNA片段；步骤二、将5‑10%（w/v）的明胶溶液，45℃条件下加入体积比1：1‑1：5的丙酮中，弃掉上清，冷冻干燥，得到纯化明胶，并配成5%（w/v）纯化明胶溶液；步骤三、取1‑2mL步骤二中所得纯化明胶溶液于50mL烧杯中，在50℃，200‑600转/分钟的搅拌速度下，加入50‑500μL步骤一所得DNA溶液，按照0.5mL/s的速率滴加2‑5mL浓度2mol/L醋酸钠溶液，并补加蒸馏水使溶液的总体积为10mL，继续搅拌10分钟；加入0.5mL表面活性剂，并将体系温度降到15‑30℃，继续搅拌30分钟；所述步骤三中的表面活性剂包括吐温‑20、吐温‑40、吐温‑60、吐温‑65、吐温‑80、吐温‑85、司盘‑20、司盘‑40、司盘‑60、司盘‑80中的一种；步骤四、逐滴滴加蛋白沉淀剂，至溶液浑浊，并在1分钟内不再澄清，加入溶剂化试剂至溶液澄清，搅拌30分钟；所述的蛋白沉淀剂为硫酸钠、硫酸铵或氯化钠中的一种，或者其中两种以上任意比例的混合物；所述的溶剂化试剂为乙醇、异丙醇中的一种或这两种任意比例的 混合物；步骤五、加入50‑100μL的交联剂交联0‑90秒，随后加入2.0‑5.0mL浓度12%(w/v)偏重亚硫酸钠溶液终止交联反应，持续搅拌10h后，4℃静置过夜；所述交联剂为甲醛、戊二醛、甘油醛、表氯醇、氰酸酯、氧化葡聚糖中的一种或者其中两种以上的混合物；步骤六、透析72小时，真空冷冻干燥12小时得到白色粉末即DNA明胶纳米微凝胶；取0.005‑0.05g该粉末溶解到10mL酯胶清漆中，混匀，即可制成DNA明胶纳米微凝胶的防伪涂料。