一种实验室大规模纯化重组蛋白的方法

摘要

本发明涉及一种实验室大规模纯化重组蛋白的方法，该方法包括以下步骤：(1)将冻存的菌体放于烧杯里，按比例额加上裂解缓冲液，充分混匀；(2)将溶解好的大体积菌体直接用高压匀浆仪充分裂解；(3)将裂解好的菌体置于预冷的离心机里离心，离心好的上清液换新的离心杯后再次离心；(4)将澄清上清液倒于烧杯中，然后将预先平衡的填料加到烧杯中，置于恒温磁力搅拌器上于4℃冰箱搅拌2-3小时；(5)搅拌孵育后，静置30min，将上清液倒出，剩下的底部含有填料的样品再低速离心，去除上清，将离心下来的填料用裂解缓冲液悬起直接上到层析柱中，根据不同的纯化填料用对应的裂解缓冲液洗脱目的蛋白。本发明具有节省人力、质量可控、成本低等优点。

主权项

一种实验室大规模纯化重组蛋白的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)融菌将冻存的菌体放于烧杯里，按比例额加上裂解缓冲液，将装有菌体的烧杯置于电动搅拌机的搅拌桨中充分混匀；(2)高压匀浆裂解菌体将溶解好的大体积菌体直接用高压匀浆仪充分裂解；(3)离心将裂解好的菌体分装于500ml离心杯中，两两平衡后置于预冷的离心机里离心，离心好的上清液换新的离心杯后再次离心；(4)搅拌填料上样将澄清上清液倒于烧杯中，然后将预先平衡的填料加到烧杯中，再放进一个转子，将烧杯置于恒温磁力搅拌器上于4℃冰箱搅拌2‑3小时；(5)洗脱目的蛋白搅拌孵育后，静置30min，将上清液倒出，剩下的底部含有填料的样品再用500ml的离心杯低速离心，去除上清，将离心下来的填料用裂解缓冲液悬起直接上到层析柱中，根据不同的纯化填料用对应的裂解缓冲液洗脱目的蛋白。