发明名称 |
一种合成短单链脱氧核糖核苷酸探针的方法 |
摘要 |
本发明属于DNA生物合成领域,具体涉及一种合成短单链脱氧核糖核苷酸探针方法及其应用,可用于检测小的非编码核糖核酸,如微核糖核酸,包括如下步骤:(1)制备重组有模板DNA的质粒;(2)切割并连接模板DNA,从重组质粒上酶切获得模板DNA,使模板DNA首尾连接成环;(3)切单链,滚环复制,用切口酶切断模板DNA的一条链,加入聚合酶以环状带切口的DNA为模板进行滚环复制,扩增出含颈环-探针结构的DNA单链;(4)目的短单链DNA的制备,对步骤(3)的产物采用Ⅱ型内切酶切割形成目的单链DNA探针和副产物DNA,通过PAGE分离纯化得到无突变的单链DNA探针。本发明在小非编码RNA检测领域和小非编码RNA相关疾病的诊断和治疗领域具有广泛用途。 |
申请公布号 |
CN103276074A |
申请公布日期 |
2013.09.04 |
申请号 |
CN201310189835.1 |
申请日期 |
2013.05.21 |
申请人 |
昆山彭济凯丰生物科技有限公司 |
发明人 |
彭长庚;温婷 |
分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I;C12N15/11(2006.01)I;C12N15/10(2006.01)I |
主分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
代理机构 |
南京纵横知识产权代理有限公司 32224 |
代理人 |
董建林 |
主权项 |
一种合成短单链脱氧核糖核苷酸探针的方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)制备重组有模板DNA的质粒设计模板DNA序列:模板DNA为双链,两端含有相同的酶切位点;模板DNA设有至少一个颈环‑探针结构;模板DNA还带有切口酶位点。合成所述的模板DNA并连接至质粒中,经测序验证无突变并扩增;(2)酶切并连接模板DNA从重组质粒上酶切获得模板DNA,使模板DNA首尾连接成环;(3)切单链,滚环复制用切口酶切断模板DNA的一条链,加入DNA聚合酶以环状带切口的DNA为模板进行滚环复制,扩增出含颈环‑探针结构的DNA单链;(4)目的短单链DNA的制备对步骤(3)的自发形成颈环二级结构的DNA单链产物采用内切酶切割形成与微RNA完全互补的目的单链DNA探针和副产物DNA,通过PAGE分离纯化得到含单一序列的无突变的单链DNA探针。 |
地址 |
215300 江苏省苏州市昆山市高新区晨丰路209号 |