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一种核壳型分子印迹纳米硅球的制备方法，其特征在于步骤如下：1）双键化的纳米硅球的合成将四乙氧基硅烷加入乙醇、水和25w%氨水的混合溶剂a中，18‑25℃下搅拌24小时，将γ‑甲基丙烯酰氧丙基三甲氧基硅烷加入上述溶液中，18‑25℃下搅拌48小时，将所得溶液在10,000 rpm 转数下离心10min，收集产物，用乙醇重悬洗涤3次，将离心后产物置于真空干燥箱中室温下干燥48小时，得到双键化的纳米硅球，将该纳米硅球超声分散到体积比为1:1的乙醇和0.02M、PH 7.3磷酸钠缓冲液的混合液中，得到双键化纳米硅球的胶体溶液；2）辅助识别聚合物链（ARPCs）的合成将4‑乙烯基吡啶和丙烯腈依次加入无水乙醇中，搅拌下加入偶氮二异丁腈，氮气保护下80℃聚合反应8小时，将以上溶液倒入无水乙醇中，抽滤得到沉淀固体并将沉淀固体用乙醇洗涤2‑3次，然后在18‑25℃、真空度为0.015MPa下干燥得到聚乙烯基吡啶‑丙烯腈的无规共聚物（PANVP）；将PANVP在85w%的硫酸溶液中100℃下水解4小时得到聚乙烯基吡啶‑丙烯酸的无规共聚物（PAAVP），将PAAVP在无水乙醇‑水的混合溶剂b中沉淀出来并用混合溶剂b洗涤2‑3次，然后18‑25℃、真空度为0.015MPa以下干燥24小时；再将PAAVP、 N,N'‑二异丙基碳二亚胺、1‑羟基苯并三唑、烯丙醇与二甲基亚砜溶剂混合，30℃下搅拌48小时，将产物在无水乙醇中沉淀并用无水乙醇洗涤2‑3次，最后在18‑25℃、真空度为0.015MPa下干燥，得到辅助识别聚合物链（ARPCs）；3）蛋白质印迹聚合物纳米硅球的制备将ARPCs加入含有克隆的免疫球蛋白重链结合蛋白质（BiP）、PH为7.3、20mM磷酸钠缓冲液中，4℃下自组装8小时；将所得自组装体溶液与1）所得双键化纳米硅球的胶体溶液混合， 4℃下自组装7小时得到反应液a；然后在反应液a中加入浓度为30w%的丙烯酰胺溶液和N,N‑亚甲基双丙烯酰胺的混合液b，在18‑25℃，抽真空至0.015Mpa以下后通氮气，反复三次除氧后并搅拌1小时，得到反应液b，在反应液b中加入浓度为10w%的过二硫酸铵溶液和N,N,N',N'‑四甲基二乙胺，18‑25℃下交联反应24小时，在10，000转/分下离心10分钟，收集沉淀，用0.02M、PH7.3的磷酸盐缓冲液反复洗涤2‑3次；最后用含0.5M氯化钾、PH7.3、20mM的磷酸钠缓冲液洗脱所得纳米硅球至电泳检测无BiP蛋白质条带，将所得产物冻干，即可得到核壳型的蛋白质印迹纳米硅球。 |
