一种扁座壳孢菌几丁质酶的分离纯化方法

摘要

本发明公开了一种扁座壳孢菌几丁质酶的分离纯化方法。将扁座壳孢菌在优化后的产酶培养基中发酵，经60%硫酸铵沉淀、DEAESepharosefastflow阴离子交换层析、SephadexG-75凝胶过滤等步骤，从发酵液获得了SDS-PAGE电泳均一的扁座壳孢外切几丁质酶，本发明特异性高，工艺简单，蛋白质不易失活，纯化效果好，回收率高，成本低，具有很好的推广应用价值。

主权项

一种扁座壳孢菌几丁质酶的分离纯化方法，其特征在于：包括以下步骤：(a) 粗酶液的制备：用优化试验筛选出的培养基培养扁座壳孢菌株，在几丁质酶活性达最高时取发酵液离心，上清液用真空抽滤，除去杂质收集滤液，向滤液中加入固体硫酸铵至饱和度为60%，4℃静置过夜，再次离心收集沉淀，用缓冲液溶解沉淀，离心溶解液除去不溶物体，上清液装于透析袋，经pH6.5的磷酸盐缓冲液透析后，再用聚乙二醇浓缩得到粗酶液(b) DEAE Sepharose fast flow阴离子交换层析：粗酶液经过PEG20000浓缩后，用起始缓冲液平衡过夜，上样于充分平衡后的DEAE Sepharose fast flow阴离子交换层析柱，再用pH6.5的NaCl缓冲液进行连续洗脱，收集具有酶活性部份(c) Sephadex G‑75凝胶过滤：用pH6.5的磷酸盐缓冲液充分平衡的Sephadex G‑75凝胶过滤层析柱，上样后，再用相同的缓冲液进行洗脱，收集有酶活性的部份。