可溶性HIV-1整合酶重组蛋白的制备方法

摘要

可溶性HIV-1整合酶重组蛋白的制备方法，属于生物技术领域。制备方法包括诱导表达、菌体破碎、纯化等步骤，所用表达培养基含有15-35g/L胰蛋白胨，10-20g/L酵母提取物，2-3g/L氯化钠，1g/L葡萄糖，10-15g/L甘油，2.05g/L磷酸氢二钠，1.27g/L磷酸二氢钠，50mg/L硫酸镁，60mg/L卡那霉素，所用裂解缓冲液含有20mM 4-羟乙基哌嗪乙磺酸，1M氯化钠，2mM β-巯基乙醇，0.3mg/ml溶菌酶，5mM咪唑，pH值为9.0。表达培养基可保证宿主菌的正常生长和目的蛋白的高效表达，裂解缓冲液可加强菌体的破碎效果，增加目的蛋白的可溶性，最终提高目的蛋白的产率。

主权项

一种可溶性HIV‑1整合酶重组蛋白的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1） 将以pET‑28a（+）载体为基础构建的整合酶重组蛋白表达载体转化入大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，挑取阳性克隆接种于5 ml含有50 mg/L卡那霉素的LB液体培养基，37 ℃摇床振荡培养12‑16 h得到培养物；（2） 将（1）中的培养物按体积比1 %接种于表达培养基中，37 ℃摇床振荡培养至菌液OD600值达到0.8，加入异丙基‑β‑D‑硫代半乳糖苷至异丙基‑β‑D‑硫代半乳糖苷的终浓度为0.4 mM，37 ℃摇床振荡培养4‑5 h得到培养物；所述表达培养基含有15‑35 g/L胰蛋白胨，10‑20 g/L酵母提取物，2‑3 g/L氯化钠，1 g/L葡萄糖，10‑15 g/L甘油，2.05 g/L磷酸氢二钠，1.27 g/L磷酸二氢钠，50 mg/L硫酸镁，60 mg/L卡那霉素；（3） 将（2）中的培养物离心得到沉淀，每100 mg沉淀用1 ml裂解缓冲液重悬，室温孵育30 min，反复冻融两次之后置于冰浴中超声破碎10 min，4 ℃离心收集上清液；所述裂解缓冲液含有20 mM 4‑羟乙基哌嗪乙磺酸，1 M氯化钠，2 mM β‑巯基乙醇，0.3 mg/ml溶菌酶，5 mM咪唑，用氢氧化钠调pH值至9.0；（4） 将（3）中的上清液进行镍琼脂糖凝胶亲和层析，依次用含有20 mM、50 mM、100 mM、250 mM咪唑的洗液进行梯度洗脱，将收集到的含有目的蛋白的洗脱液透析除盐，并进行分装。