一种红豆杉成熟胚乳诱导单倍体胚乳愈伤组织的方法

摘要

本发明公开了一种红豆杉成熟胚乳诱导单倍体胚乳愈伤组织的方法。包括：（1）种子外种皮剥离：利用机械破壳，手工剥离外种皮；（2）外植体消毒：依次经70%酒精消毒90s和0.1%氯化汞消毒12min，无菌水冲洗5次后备用；（3）种子预处理：用无菌水密封常温浸种1-5天；（4）胚乳组织的分离；（5）胚乳愈伤组织的离体诱导：将种子胚乳接种到愈伤组织诱导培养基上，30天后可以获得97.92%的诱导率。本发明能简便、快速获得红豆杉成熟胚乳愈伤组织，为简化遗传分析、染色体操作、作为转基因材料以及基因组学研究材料打下基础。

主权项

一种红豆杉成熟胚乳诱导单倍体胚乳愈伤组织的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）种子种胚的剥离：将南方红豆杉（Taxales chinensis var.mairei）种子从外种皮中剥离出来；（2）外植体消毒：取步骤（1）得到的种子，用70%酒精表面消毒90s和0.1%氯化汞表面消毒12min，无菌水冲洗5次后备用；（3）种子的预处理：将步骤（2）消毒的种子用无菌水浸泡1‑5天；（4）胚乳组织的分离：在无菌条件下剥取种子的胚乳组织；（5）胚乳愈伤组织的离体诱导：将剥离的胚乳组织接种到诱导培养基上诱导愈伤组织；所述的诱导培养基为：B5培养基+Picloram2‑5mg/L+6‑BA0.5mg/L+GA33mg/L+蔗糖20g/L+琼脂7g/L，培养条件为：24±1℃条件下暗培养。