用于生产脂肪酶的方法、能产生所述脂肪酶的转化解脂耶氏酵母细胞以及它们的应用

摘要

用于生产解脂耶氏酵母耐酸重组体脂肪酶的方法，该方法利用的培养基除其使用的物质外不含任何动物来源的产物或未表征的混合物比如胰胨、蛋白胨或抗乳血清。可以生产过多量的脂肪酶Lip2的解脂耶氏酵母的重组菌株被称作YL-LIP2-6C，该菌株于2005年12月15日保藏在法国培养物和微生物国家保藏中心(C.N.C.M.)，保藏编号为I-3542，本文还涉及其应用。

主权项

1.一种酵母耐酸的重组体脂肪酶制品，其通过包括下述步骤的方法得到：a)培养解脂耶氏酵母细胞的步骤，所述细胞是名为YL-LIP2-6C的克隆，所述克隆于2005年12月15日保藏在法国培养物和微生物国家保藏中心(C.N.C.M.)，保藏编号为I-3542；以及b)从培养液上清液中回收用所述细胞生产的所述重组体脂肪酶的步骤，该方法的特征在于，所述步骤a)包括：a1)在由下述成分组成的培养基中预培养所述解脂耶氏酵母细胞：其中所述培养基用下述添加剂富集：添加剂          最终浓度微量元素溶液    1ml/l维生素溶液      1ml/l其中微量元素溶液配方为：维生素溶液配方为：a2)发酵步骤，包括：-在步骤a1)的培养基中的细胞生长期，以及-在含有油酸作为唯一碳源的培养基中的脂肪酶生产期，并且所述重组体脂肪酶制品在pH6时的催化活性为15,000至22750个单位每毫升培养液上清液，其中一个单位对应于当使用的底物是三辛酸甘油酯时每分钟能催化释放1μmol脂肪酸的酶的量，是在含有50mM的Na₂HPO₄、50mM的KH₂PO₄、150mM的NaCl、pH6.0的缓冲液中、于37℃下测量的脂肪酶活性；并且/或者所述重组体脂肪酶制品中所述脂肪酶的浓度大于1g脂肪酶/L。