从猪脾脏提取超氧化物歧化酶的方法

摘要

本发明公开的从猪脾脏中提取超氧化物歧化酶的方法，步骤包括新鲜猪脾脏冷冻处理后，再经切碎、磨浆浸提、过滤、硫酸铵分级沉淀、IDA琼脂糖介质吸附、清洗杂蛋白、洗脱、脱盐、浓缩、冷冻干燥获得SOD纯品。本发明方法操作简单，生产成本低廉，适用于大规模工业化生产，实现了从猪脾脏中高效回收超氧化物歧化酶的目的。

主权项

一种从猪脾脏提取超氧化物歧化酶的方法，其特征在于，包括以下步骤 ：1)、 新鲜冷冻猪脾脏，切碎后加入5‑10倍体积的去离子水，搅拌混匀后，磨浆，过滤得含超氧化物歧化酶的澄清液；2)、 含超氧化物歧化酶的澄清液用30%和60%饱和度的硫酸铵分级沉淀，制备超氧化物歧化酶的粗制品；3)、 在超氧化物歧化酶粗提品中加入2摩尔pH 8.0的Tris‑Cl溶液，至溶液中含10毫摩尔pH8.0的Tris‑Cl，再经过铜‑IDA琼脂糖介质吸附超氧化物歧化酶，经洗杂、洗脱、脱盐、浓缩、冷冻干燥过程制备高纯度超氧化物歧化酶冻干粉；上述的脱盐、浓缩步骤如下：先进行超滤膜浓缩从介质上洗脱下来的SOD溶液到1/10的体积；然后加水稀释到原体积，再进行超滤膜浓缩，重复4‑5次便达到脱盐的目的；脱盐后的浓缩液加入还原剂DTT，至DTT终浓度为0.01‑1mM，不断加水稀释同时继续超滤膜浓缩；上述的超滤膜为截留分子量在1000‑10000之间的超滤膜。