一种抗鸭黄病毒鸡卵黄抗体的制备方法

摘要

本发明为一种抗鸭黄病毒鸡卵黄抗体的制备方法，属于禽病免疫技术领域。本发明将保存的鸭黄病毒AH-F10株灭活油乳化制备灭活油乳苗，免疫产蛋鸡，提取抗鸭黄病毒卵黄抗体，所述抗鸭黄病毒鸡卵黄抗体的制备方法，操作简易，制备抗鸭黄病毒卵黄抗体效价较高，具有较好的免疫及治疗效果，反应温和，应激性较小，在当下暂无商品化抗体的情况下，为解决抗鸭黄病毒抗体的制备提供了新的思路。

主权项

一种抗鸭黄病毒鸡卵黄抗体的制备方法，其制备包含如下步骤：（1）将病毒疫苗免疫产蛋鸡；（2）分离免疫后鸡蛋卵黄；（3）提取卵黄抗体；其特征在于，所述病毒疫苗按如下方法获得：取感染该病毒的鸡胚尿囊液，按体积比加入3‰甲醛于37℃摇床灭活36小时，灭活完成后，按体积比灭活病毒液96份，吐温‑80（聚山梨酯‑80 ） 4份摇匀，即得制苗用抗原，由所述制苗用抗原做为下步乳化的水相；白油佐剂做为下步乳化油相；按体积比油相3份、水相1份的比例取油相、水相搅拌乳化，制备成鸭黄病毒灭活油乳剂疫苗，并加入体积浓度1%硫柳汞溶液使硫柳汞终浓度为万分之一，摇匀备用；所述步骤（1）的具体方法为：将上述所得到的疫苗，以颈部皮下免疫处于产蛋高峰期的健康蛋鸡；疫苗用量为1mL/只，首次免疫一周后进行同等剂量及方式的加强免疫；第二次免疫二周后进行第三次同等剂量及方式的免疫；此后每四周进行一次同等剂量及方式的加强免疫；所述步骤（2）的具体方法为：收集完成第三次免疫一周后所产的鸡蛋，用体积浓度75%的酒精对蛋壳进行消毒，待蛋壳表面干燥后，用蛋黄分离机分离蛋黄；所述步骤（3）的具体方法为：①使用含聚乙二醇的生理盐水与卵黄按质量比4:1搅拌均匀后离心15min，离心转速为5000转/分钟，离心完成后取其上清液，将沉淀弃去；所述生理盐水氯化钠的质量分数为0.85%；所述生理盐水中聚乙二醇所占质量百分比为7%；②将步骤①中所得的上清液与饱和硫酸铵溶液按体积比1:1混合，混合时饱和硫酸铵溶液应徐徐加入上清液中，加以搅拌，4℃静置过夜，10000转/分钟离心20分钟，取其沉淀，将沉淀与无菌的PBS溶液按质量比1:3混合，震荡将其溶解，即为抗鸭黄病毒鸡卵黄抗体；将所述抗鸭黄病毒鸡卵黄抗体密封后保存于4℃冰箱中。