一种有效递呈胃癌抗原的树突状细胞的制备方法

摘要

一种有效递呈胃癌抗原的树突状细胞的制备方法，涉及树突状细胞。胃癌细胞MGC-803总RNA的提取、鉴定；SOCS1拮抗剂pJAK2(1001－1013)多肽的合成；外周血单个核细胞的分离；单核细胞的获取；未成熟树突状细胞的体外诱导；RNA转染未成熟树突状细胞；pJAK2(1001－1013)多肽负载RNA转染的树突状细胞；未成熟树突状细胞的成熟诱导，即可产生成熟树突状细胞。可改善树突状细胞抗原递呈功能和特异性免疫应答水平，采用SOCS1拮抗剂pJAK2(1001－1013)多肽修饰胃癌细胞总RNA转染的树突状细胞。

主权项

1.一种有效递呈胃癌抗原的树突状细胞的制备方法，其特征在于包括如下步骤：1）胃癌细胞MGC-803总RNA的提取、鉴定：采用试剂从胃癌细胞MGC-803中提取总RNA，紫外分光光度计测定RNA浓度、琼脂糖凝胶电泳鉴定RNA分子量大小；2）SOCS1拮抗剂pJAK2(1001－1013)多肽的合成；3）外周血单个核细胞的分离；4）单核细胞的获取：采用人CD14⁺单核细胞分离试剂盒从步骤3）分离得到的PBMC中分选出单核细胞；5）未成熟树突状细胞的体外诱导：将步骤4）获取的单核细胞在RPMI-1640培养基中经细胞因子GM-CSF和IL-4诱导培养后即产生未成熟树突状细胞；6）RNA转染未成熟树突状细胞；7）pJAK2(1001－1013)多肽负载RNA转染的树突状细胞：pJAK2(1001–1013)多肽与经RNA电穿孔转染的iDC孵育4h进行负载；8）未成熟树突状细胞的成熟诱导：将步骤6）和7）经RNA转染和SOCS1拮抗剂pJAK2(1001－1013)多肽负载后的iDC采用LPS和TNF-α诱导后，即可产生成熟树突状细胞。