柔嫩艾美耳球虫裂殖子提取纯化的方法

摘要

本发明公开了一种柔嫩艾美耳球虫裂殖子提取纯化的方法，其步骤包括裂殖子释出和裂殖子纯化；所述裂殖子释出由机械法研磨释出和酶消化释出组成；酶消化释出过程中采用0.625‰胰酶和1.75‰牛磺脱氧胆酸钠为消化液，消化比较温和，有利于裂殖子健活，又能消除红细胞，获得纯净的裂殖子。本发明操作简便，成本低廉，分离纯化的效果理想，其分离的裂殖子不仅数量多、纯净、杂质少，且保持了其旺盛的活力，其适用于进行药物敏感性测定、疫苗研究和其他生物学等方面的研究。

主权项

柔嫩艾美耳球虫裂殖子提取纯化的方法，其步骤包括裂殖子释出和裂殖子纯化；其特征在于：所述裂殖子释出由机械法研磨释出和酶消化释出组成；所述机械法研磨释出是将感染了孢子化卵囊后发育至裂殖子阶段的离体的鸡盲肠黏膜机械刮下，然后将黏膜组织充分研磨，使裂殖体游离出来；所述酶消化释出是将经过机械法研磨释出的黏膜膜组织按体积比1 : 1~1.5的量加入pH值为7.2~7.4的PBS溶液研磨混匀，再用80~100目筛粗过滤后，向滤液中按体积比1 : 1~1.5的量加入0.625‰胰酶和1.75‰牛磺脱氧胆酸钠混合液，充分摇匀，置37~38℃摇床消化，每隔10~15min镜检一次，当观察到大多数裂殖体破裂，释出裂殖子，无红细胞时，按2.5%加入小牛血清终止消化反应，得到黏膜组织液；所述裂殖子纯化是指将裂殖子释出的黏膜组织液用80~100目筛粗过滤，滤液经2500~3000r/ min离心10~15 min，将沉淀用pH值为7.2~7.4的PBS溶液重悬，然后再用100~800目筛抽滤，滤液再经800~1000目筛抽滤一次，即可获得纯化的裂殖子。