特异检测蛋白质或多肽半胱氨酸巯基修饰的方法及其用途

摘要

本发明涉及一种在排除分子间二硫键干扰的条件下特异检测蛋白质或多肽半胱氨酸巯基相关修饰的方法；涉及执行所述方法的试剂盒，涉及所述试剂盒用于筛选新的生理病理相关的内源靶点或者外源半胱氨酸巯基相关修饰的蛋白质或多肽靶点，用于筛选与设计可以调节蛋白质或多肽半胱氨酸巯基相关修饰的药物，和用于检测样品中半胱氨酸巯基相关修饰含量的用途。

主权项

一种特异检测蛋白质或多肽半胱氨酸巯基相关修饰的方法，包括下列步骤：1)使用自由巯基特异性封闭试剂封闭所述蛋白质或多肽上的自由巯基；2)除掉未结合的封闭试剂，使用所述半胱氨酸巯基相关修饰的特异性还原剂将被修饰的半胱氨酸巯基还原为自由巯基，同时加入巯基特异性不可逆的标记试剂将被还原的自由巯基标记为带有标签的巯基；3)除去未结合的标记试剂后，加入二硫键还原试剂，还原蛋白质或多肽分子间的二硫键；和4)亲和纯化具有带有所述标签的巯基的蛋白质或多肽，使用亲和素变性的方法来洗脱所述蛋白质或多肽，并随后对洗脱的蛋白质或多肽进行蛋白质或多肽印迹或者质谱鉴定。