主权项 |
一种糜蛋白酶的纯化工艺,其特征在于包括以下步骤:(1)取牛胰,将脂肪、结缔组织除去,绞碎成胰浆;(2)向胰浆中加入硫酸溶液进行提取,过滤;(3)滤液中加入硫酸铵至0.4饱和度,冷室中放置过夜;(4)过滤,滤液用截留分子量50kDa的超滤膜进行超滤;(5)滤出液用截留分子量5‑10kDa的超滤膜进行超滤;(6)截留液加硫酸铵至0.7饱和度,低温放置过夜;(7)过滤,将滤饼溶于冷纯化水中,冷纯化水的体积数为滤饼质量数的3‑5倍,加硫酸调pH为2.0,搅拌使溶解,加入饱和硫酸铵溶液,饱和硫酸铵溶液的体积数为滤饼质量数的2倍,调pH至5.0,25℃,孵育2‑5 h,有晶体析出,过滤收集晶体;(8)晶体用冷纯化水加硫酸溶解,冷纯化水的体积数为晶体质量数的3‑5倍,调节pH 7.6,加入胰蛋白酶,20℃活化2‑4 h ;(9)调节pH 至4.0,加入固体硫酸铵使达0.7饱和度,过滤收集沉淀;(10)沉淀用冷纯化水加硫酸溶解,用截留分子量10kDa的超滤膜进行超滤;(11)将上述超滤脱盐的料液加至已用0.05mol/L NaAC 缓冲液平衡好的SP离子交换柱上,用3倍柱体积的含0.2 mol/L NaCl 的缓冲液洗柱,用3倍柱体积的含0.4 mol/L NaCl 的缓冲液洗脱得洗脱液;(12)将上述洗脱液用截留分子量10‑30kDa的超滤膜进行超滤,除菌,既得。 |