北虫草最佳组织分离期筛选方法

摘要

本发明公开了一种北虫草最佳组织分离期筛选方法，选用北虫草子实体的五个不同生长发育期，即原基、子实体生长15天、子实体生长30天、子实体生长45天、子实体生长60天的组织进行母种分离，以便筛选最优的组织分离材料，通过上述筛选方法可以得出，北虫草生长至原基时期组织分离得到的母种菌丝体长速最快、长势最好、转色最快、转色效果最好，所以北虫草生长至原基时是最适合做母种组织分离的时期，原因是与北虫草生长不同时期的菌丝体细胞活力有关，原基时期的菌丝体细胞分化程度最低，细胞活力最高，在这个时期进行组织分离得到的母种活力最好，长势也最好。

主权项

一种北虫草最佳组织分离期筛选方法，其特征在于，选用北虫草子实体的五个不同生长发育期，即原基、子实体生长15天、子实体生长30天、子实体生长45天、子实体生长60天的组织进行母种分离，以便筛选最优的组织分离材料，该筛选方法具体步骤如下：(1)选取培养基与配制配方：马铃薯200g、琼脂20g、葡萄糖20g、蛋白胨5g、酵母片5g、K2HPO40.5g、pH自然、水1000ml，其配制方法是：先将配方中各组分用电子天平称量好，然后将称好的马铃薯切成条状，放入沸水中煮20‑30分钟，期间用玻璃棒不断搅拌，以防马铃薯被煮焦；再将煮好的马铃薯用纱布过滤两遍，取滤液；然后将滤液放到电磁炉上边加热边将琼脂加入其中，并用玻璃棒不断搅拌，最后将其它成分依次加入其中；待各种组分充分溶解后，定容至1000ml，用180mm×18mm的试管分装，每支试管分装8ml，加盖棉塞，并盖几层报纸，置高压灭菌锅内灭菌，121℃维持30分钟，然后取出摆斜面，冷却，无菌检验后待用；(2)组织分离，北虫草母种分离材料的选取与采样：分离材料选取的前提条件是栽培中未被污染，分别在五个不同生长发育时期选取生长发育良好的虫草作为组织分离的材料，具体方法如下，原基时期的选取原基较多、分布均匀的栽培瓶，子实体时期的选取虫草形态良好，生长健壮的子实体，将选好的栽培瓶放入无菌操作室内待用；组织分离接种与培养：接种前将接种所用工具及摆好斜面的培养基试管放到超净工作台中，然后将接种室和超净工作台中的紫外灯打开，照射30分钟之后暗处理20分钟，在超净工作台内用酒精棉球擦拭双手和栽培瓶外表，然后在酒精灯火焰旁打开栽培瓶的封口膜，原基直接用接种 锄挑取一小块接入到培养基中央，对于其他时期的分离材料，用无菌剪刀剪取虫草子实体上端一小截，然后用接种锄接入到培养基上，每一时期的虫草分别接10支，然后置于恒温培养箱内23℃下培养，每天定时观察，记录不同时期的组织块在培养基上的定植萌发及菌丝生长情况；(3)转色，将培养完成的长满菌丝体的试管置于温度为20℃有散射光照射的环境中进行转色，每天定时进行观察，记录不同时期的转色速度，七日后观察不同时期的转色率；(4)第(2)、(3)步骤重复三次。