甘蓝型油菜玻璃化再生苗的去玻璃化方法

摘要

本发明所述一种甘蓝型油菜玻璃化再生苗的去玻璃化方法，属于生物技术领域。将组织培养过程中产生的玻璃化再生苗在超净工作台上通过无菌操作切分出来，并转移至无任何培养基的无菌培养瓶中，封口，置含有玻璃化苗的培养瓶于光照培养箱中进行饥饿（无培养基）、低温（5℃）、强光照（100-150μmol/s/m2）处理，然后将处理过的玻璃化苗转移至基本培养基中继代培养，培养条件：光照强度：50μmol/s/m2，光照周期：16小时光照，8小时暗，时间3-7天。应用本技术可以使甘蓝型油菜组织培养过程中产生的玻璃化再生苗去玻璃化，经继代培养再生成正常苗。

主权项

1）甘蓝型油菜玻璃化不定芽处理：待甘蓝型油菜玻璃化不定芽分化至2‑5片叶时，将玻璃化芽或芽丛在超净工作台上，无菌条件下从培养皿（瓶）中取出，放入无任何培养基的无菌培养皿中，用保鲜膜封好培养皿的缝隙，置玻璃化芽或芽丛于光照培养箱中、设置温度5℃，光强达到100‑150μmol/s/m2以上，光周期设置为16小时光照、8小时暗，处理24‑48小时；2）处理后的不定芽生长：将经过1）处理后的不定芽或芽丛于超净工作台上无菌条件下，取出并置入含芽生长培养基的培养瓶中继代培养；芽生长培养基成分： 1/2 MS无机盐，B5维生素，3%蔗糖，1%琼脂，无激素，ph5.8；培养条件：25℃，光照强度40‑50μmol/s/m2 ，光照周期：16h光照，8h黑暗；时间3‑7天；原玻璃化芽或芽丛可转为正常芽或芽丛；3）如果经步骤2）培养处理1周时间后的玻璃化苗没有逆转为正常苗，再进行一次步骤2）处理，然后继代培养3‑7天，原玻璃化芽或芽丛即转为正常芽或芽丛。