一种提高16α，17α-环氧黄体酮转化率的方法

摘要

本发明提供了一种利用赭曲霉在两相系统中催化生产11α-羟基-16α，17α-环氧黄体酮的方法。通过添加有机溶剂邻苯二甲酸二丁酯，有效地解决底物和产物的溶解问题，增加与细胞的接触面积，简化分离过程，缩短了转化的时间，大大提高了底物的转化率，16α，17α-环氧黄体酮转化率可达84％以上，为生产出高收率、高纯度的11α-羟基-16α，17α-环氧黄体酮奠定了坚实的实践生产基础，从而降低了生产成本，提高了企业经济效益。

主权项

一种提高16α，17α‑环氧黄体酮转化率的方法，包括以下步骤：(1)斜面制备将赭曲霉试管菌种接种于土豆斜面培养基，25‑28℃恒温培养4‑7d生成黄色孢子，然后转接在酵母膏斜面培养基斜面上，25‑28℃培养7‑10d，可生成金黄色孢子，即得生产用斜面，于冰箱中4℃恒温保存2‑3个月备用；(2)孢子悬液制备将含2‰(w/v)吐温80的无菌水加入步骤(1)保存的生产斜面中，洗下孢子，血球计数板计数，配制、调整孢子悬液浓度为4×106‑8×106个/mL；(3)静息细胞制备将步骤(2)中的孢子悬液按8‑10％的接种量接入液体培养基，28‑30℃培养24‑30h后，发酵液抽滤，用3‑5倍的无菌水洗涤菌体两遍，即得菌体静息细胞；(4)两相体系中的转化向加塞瓶中加入双液相培养基和步骤(3)中的静息细胞，同时加入16α，17α‑环氧黄体酮和浓度为30％的H2O2溶液，于28‑30℃，180‑200r/min振荡培养46‑48h；(5)过滤将步骤(4)中的发酵液于室温用500‑800目滤布预涂硅藻土，采用板框过滤机进行过滤，操作压力为0.14‑0.24Mpa；所述硅藻土粒度为100目‑300目；(6)萃取将步骤(5)中的滤液于80℃加热30min，冷却至室温，以乙酸乙酯萃取3次；(7)结晶萃取后利用旋转蒸发仪将有机相浓缩，室温冷却结晶；(8)重结晶精制结晶产物再用82％(v/v)氯仿‑甲苯混合溶剂进行重结晶精制，60℃烘干至恒重，既得11α‑羟基‑16α，17α‑环氧黄体酮白色针状结晶体。